Монография № : см001/V1 Обзор неклинических исследований



Скачать 462.75 Kb.
страница1/3
Дата28.07.2016
Размер462.75 Kb.
ТипОбзор
  1   2   3


Клиническая монография

: СМ001/V1


  1. Обзор неклинических исследований



    1. Введение и надлежащая практика лабораторных исследований

Для интерферона бета-1а компании «CinnaGen» («СиннаГен») был проведен полный комплекс обычных испытаний на токсичность, придерживаясь руководств ICH-S6, Дополнение Y, CDER (Центр оценки и исследований биопрепаратов), а также правил ОЭСР (Организация экономического сотрудничества и развития) (повторные испытания на токсичность дозы).

Данные исследования проводились в Прикладном фармацевтическом научно-исследовательском центре, фармацевтической школе, Университете медицинских наук в Тегеране, Тегеран, ИРАН и «CinnaGen Biopharma» («СиннаГен Биофарма»).

Сертификаты о надлежащей лабораторной практике лаборатории Прикладного фармацевтического научно-исследовательского центра, Тегеран, ИРАН предоставляются в качестве приложений к данному модулю.


    1. Обзор неклинической стратегии тестирования

Для проведения неклинического сравнения фармакодинамическая активность интерферона бета-1а компании «CinnaGen» и Зарегистрированного медицинского препарата (ЗМП) АВОНЕКС®, произведенный компанией «Biogen Idec Inc.» («Биоген Идек Инк.»), США, была оценена с помощью проведения следующих испытаний в лабораторных и естественных условиях:

а) анализом поверхностного плазмонного резонанса (ППР)

б) в А-549 (линия раковых клеток в человеческом легком), которая выражает регулятор вырабатывания ИФН



  • Мониторинг активации нижележащей сигнальной молекулы, фосфорилирование STAT3 изучалось в тех же клетках А-549.

  • Защита клеток, вызванная фосфорилированием STAT3, то же самое можно увидеть при проведении анализа пролиферации в клетках А-549.

  • В результате пролонгирование продолжительности существования клетки А-549 было определено путем фрагментации ДНК, основанной на анализе апоптоза.

  • Биологическая активность в естественных условиях была исследована на модели мыши, используя неоптерин и Бета-2 МГ (бета-2-микроглобулин) в качестве основной фармакодинамической метки.

    1. Фармакология

Как выяснилось, интерфероны имеют идентичные механизмы действия, защищая клетки от вирусов в течение 24 часов после введения. Индикацией интерферона бета-1а является уменьшение рецидива у пациентов с рассеянным склерозом. Интерферон бета-1а связывается с рецептором интерферона (регулятор вырабатывания ИФН), который вызывает активацию нижележащих внутриклеточных сигнальных молекул. Сигнальный каскад приводит к фосфорилированию STAT3, в результате чего происходит пролиферация клеток. Неоптерин и Бета2-МГ представляют собой продукты, вызванной интерфероном циклогидролазы ГДФ; оценка сывороточной концентрации данных препаратов после повторного введения отображает нижележащую биологическую реакцию на активацию рецептора интерфероном бета.

Фармакодинамика в лабораторных условиях

Способность интерферона бета-1а производства компании «CinnaGen» стимулировать функцию противовирусной активности сравнивалась с препаратом АВОНЕКС®. Кроме того, было установлено, что выведение обоих препаратов осуществляется с помощью подобных опосредуемых рецептором и неспецифических механизмов.



Фармакодинамика в естественных условиях

Фармакодинамическое воздействие интерферона бета-1а производства компании «CinnaGen» и ЗМП исследовалось на одноразовой дозе 1000 мкг/кг массы тела мышей (швейцарский альбинос). Во время исследования I здоровые самцы швейцарских мышей-альбиносов были произвольно разделены на 4 группы, каждая группа состоит из 6 мышей, а именно на группу нормального контроля, группа контроля колониестимулирующей активности (КСА) и две лечебные группы (КСА+PGASOI09 и КСА+ЗМП). Во время исследования II здоровые самцы швейцарских мышей-альбиносов были произвольно разделены на 5 групп, каждая группа состоит из 6 мышей, а именно на группу нормального контроля и три лечебных группы (FCB-0301/FCB-0401 и ЗМП-040084).

Фармакодинамическое воздействие было определено оценкой неоптерина сыворотки и Бета 2-микроглобулина. Была измерена сывороточная концентрация неоптерина и Б2-МГ. Кровь для определения неоптерина сыворотки и концентрации Бета2-МГ была взята непосредственно перед введением, а также в 6, 12, 24, 30, 36, 48, 72, 96 и 144 часа после введения.

Группа, пациенты которой принимали интерферон бета-1а компании «CinnaGen» и ЗМП, показала подобный (p<0,05) уровень увеличения концентрации неоптерина и Б2-МГ.



    1. Фармакокинетика

Для оценки концентрации интерферона бета-1а в плазме, интерферон бета-1а производства «CinnaGen» и ЗМП были введены внутримышечно самцам крыс Уистара одноразово дозой 1 ММЕ/кг. Пробы крови были взяты с ретро-орбитального синуса животных и далее были использованы для определения концентрации интерферона бета-1а в плазме. Утвержденный метод анализа цитопатического эффекта (ЦПЭ) использовался для анализа концентрации интерферона бета-1а. Анализ выявил способность интерферона бета защищать раковые клетки в человеческом легком (А549, #CCL-185, ATCC, Rockville, MD) от цитотоксичности в связи с инфицированием вирусом энцефаломиокардита (ЭМК). Вариация для серии анализов была определена расчетом доверительного интервала в 95% выше средней внутренней стандартной концентрации интерферона бета для 323 аналитических планшетов. Анализ, используемый для определения концентрации интерферона бета-1а в плазме, представляет собой чувствительный метод с низким пределом количественного определения 10 Е/мл. Как определено, вариация была меньше 10% среднего значения.

Фармакокинетические параметры были рассчитаны с помощью анализа без учета компартментов. Используя кривую время/изменение концентрации до последней измеримой точки времени, AUC(0-t) было получено прямо пропорциональным трапецоидальным сложением. Kel является выраженным конечным коэффициентом кинетики, который был рассчитан линейной регрессией измененных концентраций препарата на конечном этапе. Время полужизни t1/2 конечного этапа выведения было получено при использовании взаимосвязи t1/2 = 0,693/Kel. Коэффициент очищения был получен при использовании взаимосвязи CL= доза/AUC(0-).

После одноразового внутримышечного введения интерферона бета-1а крысам Уистара было установлено, что и интерферон бета-1а и ЗМП имеют схожую полужизнь, системное воздействие и коэффициент очищения.


    1. Токсикология

Для определения вида, способа применения и зависимого различия дозы в профиле токсичности интерферона бета-1а «CinnaGen» были проведены различные исследования с соблюдением директив ICH 1997 г. (Международная конференция по гармонизации), S6 – Доклиническая оценка безопасности лекарственных препаратов, произведенных благодаря биотехнологиям.

Таблица 1.5-1 Выводы токсикологических исследований

Номер исследования

Название исследования

Количество/пол/группа

Доза

0401

Интерферон бета-1а: одноразовая доза

Внутримышечное введение, токсикологическое исследование на швейцарских мышах-альбиносах



5/пол/группа

30, 60 и 120 мкг/кг













0402

Интерферон бета-1а: одноразовая доза

Внутримышечное введение, токсикологическое исследование на крысах Уистара



5/пол/группа

10, 20 и 30 мкг/кг













0403

Интерферон бета-1а: одноразовая доза

Подкожное введение, токсикологическое исследование на крысах Уистара



5/пол/группа

10, 20 и 30 мкг/кг













0404

Интерферон бета-1а: доза, повторяемая через 45 дней (дозировка раз в неделю)

Внутримышечное введение, токсикологическое исследование на крысах Уистара



8/пол/группа (основная и реверсная)

3/пол/группа (ТК)



10, 20 и 30 мкг/кг

(основная) 30 мкг/кг

(реверсная) 10, 20 и 30 мкг/кг (ТК)














0405

Интерферон бета-1а: доза, повторяемая через 45 дней (дозировка раз в неделю)

Внутримышечное введение, исследование на новозеландских белых кроликах



2/пол/группа

10, 20 и 30 мкг/кг

(основная) 20 мкг/кг

(реверсная)














0406

Интерферон бета-1а: одноразовая доза

Внутримышечное введение, исследование возбудимости на новозеландских белых кроликах



5 самок

1,0 мл (30 мкг)













0407

Интерферон бета-1а: одноразовая доза

Подкожное введение, исследование возбудимости на новозеландских белых кроликах



4 самца

0,5 мл (15 мкг)













Токсичность одноразовой дозы

Исследование токсичности одноразовой дозы на швейцарских мышах-альбиносах при внутримышечном введении:

Для определения токсичности одноразовой дозы интерферона бета-1а 5 мышам/пол/группа была введена внутримышечно одноразовая доза буферной смеси лекарственного препарата или интерферона бета-1а в размере 30, 60 и 120 мкг/кг массы тела. В течение периода проведения исследования 14 дней за животными вели наблюдение на предмет клинических признаков токсичности, болезненности, смертности, потери массы тела, гематобиохимических и общих патологических изменений. Введение интерферона бета-1а не вызвало смертельных случаев при введении до 120 мкг/кг массы тела. Лечение не оказало воздействия на массу тела, потребление пищи и гематобиохимические параметры. Следовательно, дозы 30, 60 и 120 мкг/кг массы тела считаются не токсичными для швейцарских мышей-альбиносов при внутримышечном введении.



Исследование токсичности одноразовой дозы на крысах Уистара при внутримышечном введении:

Для определения токсичности одноразовой дозы интерферона бета-1а 5 крысам/пол/группа была введена внутримышечно одноразовая доза буферной смеси лекарственного препарата или интерферона бета-1а в размере 10, 20 и 30 мкг/кг массы тела. В течение периода проведения исследования (14 дней) за животными вели наблюдение на предмет клинических признаков токсичности, болезненности, смертности, потери массы тела, гематобиохимических и общих патологических изменений. Введение интерферона бета-1а не вызвало смертельных случаев при введении до 30 мкг/кг массы тела. Лечение интерфероном бета-1а вызвало развитие раздражительности при введении 30 мкг/кг массы тела. Лечение не оказало воздействия на массу тела, потребление пищи и гематобиохимические параметры. Следовательно, дозы 10, 20 и 30 мкг/кг массы тела считаются не токсичными для крыс Уистара при внутримышечном введении.



Исследование токсичности одноразовой дозы на крысах Уистара при подкожном введении:

Для определения токсичности одноразовой дозы интерферона бета-1а 5 крысам/пол/группа была введена подкожно одноразовая доза буферной смеси лекарственного препарата или интерферона бета-1а в размере 10, 20 и 30 мкг/кг массы тела. В течение периода проведения исследования 14 дней за животными вели наблюдение на предмет клинических признаков токсичности, болезненности, смертности, потери массы тела, гематобиохимических и общих патологических изменений. Введение интерферона бета-1а не вызвало смертельных случаев при введении до 30 мкг/кг массы тела. Лечение интерфероном бета-1а вызвало развитие раздражительности при введении указанных доз. Лечение не оказало воздействия на массы тела, потребление пищи и гематобиохимические параметры. Следовательно, дозы 10, 20 и 30 мкг/кг массы тела считаются не токсичными для крыс Уистара при внутримышечном введении.



Токсичность повторной дозы

Исследование токсичность повторной дозы в течение 45 дней (еженедельная дозировка) на крысах Уистара при внутримышечном введении:

Для определения токсичности повторной дозы интерферона бета-1а 8 крысам/пол/группа вводилась внутримышечно (один раз в неделю) буферная смесь лекарственного препарата или интерферона бета-1а в размере 10, 20 и 30 мкг/кг массы тела в течение 45 дней. В течение 23 дней за контрольными и лечебными группами вели наблюдение. В течение периода проведения исследования были проведены наблюдения и измерения на предмет смертности/болезненности, клинических признаков токсичности, массы тела, приема пищи, гематологии, клинической биохимии и патологии. Введение интерферона бета-1а не вызвало смертельных случаев и появление клинических признаков при введении до 30 мкг/кг. Лечение интерфероном бета-1а не вызвало воздействия на массу тела и потребление пищи. В группах, где вводился интерферон бета-1а, было установлено увеличение показателей общего числа эритроцитов у самцов и общего числа лейкоцитов вместе с нейтрофилами и лимфоцитами у обоих полов. Наблюдаемые изменения в гематологии оказались обратными после прекращения лечения. Биохимические изменения, связанные с интерфероном бета-1а, не были установлены ни в одной из групп, в которых проводилось лечение. Было установлено увеличение среднего отношения G:E у животных, которым вводили интерферон бета-1а в объеме 30 мкг/кг. Увеличенный вес селезенки был установлен во всех группах самцов, которым вводили интерферон бета-1а. Незначительная гипертрофия селезенки была установлена во всех группах животных, которым вводили интерферон бета-1а. Зависящее от дозы среднее систематическое влияние интерферона бета-1а было установлено без какого-либо полового воздействия. Связывающие антитела к интерферону бета-1а были обнаружены у животных с наименьшим уровнем заболеваемости. Следовательно, повторное лечение интерфероном бета-1а дозой до 30 мкг/кг массы тела (еженедельно) хорошо переносится без явного отрицательного воздействия на крыс Уистара при внутримышечном введении.



Исследование токсичности повторной дозы в течение 45 дней (еженедельная дозировка) на новозеландских белых кроликах при внутримышечном введении:

Для определения токсичности повторной дозы интерферона бета-1а 2 кроликам/пол/группа буферная смесь лекарственного препарата или интерферона бета-1а вводилась внутримышечно (один раз в неделю) в размере 10, 20 и 30 мкг/кг массы тела в течение 45 дней. В течение 23 дней за контрольной и лечебной группами вели наблюдение. В течение периода исследования были проведены наблюдения и измерения на предмет смертности/болезненности, клинических признаков токсичности, изменения массы тела, приема пищи, гематологии, клинической биохимии и патологии. Введение интерферона бета-1а не вызвало смертельных случаев и появление клинических признаков при введении до 30 мкг/кг. Лечение не вызвало воздействие на массу тела и потребление пищи. Во время лечения интерфероном бета-1а было установлено увеличение показателей общего числа лейкоцитов и нейтрофилов у самок со всех групп, получавших лечение. Было установлено незначительное увеличение отношения G:E костного мозга у обоих полов при введении 30 мкг/кг. Лечение интерфероном бета-1а не оказало воздействия на вес органов. Гипертрофия селезенки была обнаружена у животных, которым вводили 20 и 30 мкг/кг. Следовательно, повторное лечение интерфероном бета-1а дозой до 30 мкг/кг массы тела (еженедельно) систематически хорошо переносится без явного отрицательного действия на новозеландских белых кроликов при внутримышечном введении.


Исследование сенсибилизации кожи морских свинок:
Для проведения данного исследования 16 животных разделили на 2 группы (Группа 1: лечебная группа: 5 самцов + 5 самок и Группа 2: контрольная группа: 3 самца + 3 самки). Сенсибилизация была обнаружена при внутрикожном введении полного адъюванта Фрейнда. Использовались три пары по 0,1 мл внутрикожного введения.

  • Введение 1-1:1 смеси (в объемном отношении) полный адъювант Фрейнда / дистиллированная вода

  • Введение 2 – 10 % интерферона бета-1а в составе буферной смеси

  • Введение 3 – 1:1 смеси 1-го и 2-го введения

Введение 1, 2 и 3 были сделаны в выстриженную плечевую область животных лечебной группы в день 0. На 6 день фильтровальная бумага была пропитана интерфероном бета-1а «CinnaGen» и нанесена на выстриженную сторону. На 8 день окклюзионные повязки были сняты с каждого животного испытательной группы. Животные контрольной группы были исследованы таким же образом, только вместо интерферона бета-1а использовалась буферная смесь. Для местного применения на 20 день фильтровальная бумага была пропитана интерфероном бета-1а «CinnaGen» и нанесена на выстриженную область тела крыс. На 22 и 23 день был измерен уровень эритемы и эдемы. Исследование по поиску/подбору/определению диапазона доз было проведено с целью определения концентрации интерферона бета-1а, который должен быть введен животным. На основании результатов исследования максимальная концентрация 10% интерферона бета-1а (1:1 смесь полного адъюванта Фрейнда) была утверждена для внутрикожного введения, и 1 мг интерферона бета-1а был утвержден в качестве максимальной концентрацией для местного введения. Кожные реакции наблюдалась спустя 1–24 часа после снятия повязки на 8 день для исследования внутрикожного введения. Аналогичным образом на 22 день (48 часов) и 23 день (72 часа) был проведен осмотр кожи группы местного введения. Уровень эритемы и эдемы был определен в соответствии со шкалой классификации Магнуссона-Клигмана для определения реакции аппликационной кожной пробы. В данном исследовании не было установлено клинических признаков токсичности, изменения массы тела, кожных реакций и эритематозной реакции, как в лечебной, так и в контрольной группах. На основании вышеуказанных наблюдений и результатов можно прийти к выводу, что интерферон бета-1а не является сенсибилизирующим веществом.



    1. Интегрированный обзор и заключения

Интерферон бета-1а «CinnaGen» является нетоксичным на основании проведенного исследования клеточных линий А-549 в лабораторных условиях и исследования на различных животных в естественных условиях.

    1. Список литературы

Р.Факунага и др. (1990 г.), Журнал «The Journal of Biological Chemistry» 265: 14008-14015.

Ссылки на методические рекомендации:



  1. Европейский отчёт по оценке лекарственного препарата, Научно-исследовательское обсуждение АВОНЕКСА® (AVONEX®), 1999 г.

  2. Организация экономического сотрудничества и развития (ОЭСР) – Принципы надлежащей практики лабораторных исследований, Монография ОЭСР, 1998 г.

  3. ICH-S6, Доклиническая оценка безопасности лекарственных препаратов, произведенных благодаря биотехнологиям, июль 1997 г.

  4. Руководство для отрасли по оценке максимальной безопасной начальной дозы при первоначальных клинических исследованиях клинической медицины Центра оценки и исследований биопрепаратов на взрослых здоровых добровольцах, продуктах питания и препаратах для введения (CDER), июль 2005 г., Фармакология и токсикология.

  5. АВОНЕКС®; Инструкция по медицинскому применению препарата.

  6. EMEA/CHMP/3132912005 «Руководство по биоподобным медицинским препаратам».

  7. Руководство ВОЗ по оценке подобных биотерапевтических препаратов (SBP).

1.5 Доклиническая сводка

1.5.1 Введение

Интерфероны представляют собой семью природных белков и гликопротеинов, которые создаются эукариотическими клетками под действием вирусной инфекции и других биологических возбудителей. Интерферон бета, один из членов данной семьи, создается различными видами клеток, включая фибробласты и макрофаги. Природный интерферон бета и интерферон бета-1а подвергнуты гликозилированию, каждый содержит единственную молекулу карбогидрата в форме N-связанного комплекса. Гликозилирование других белков известно воздействием на их стабильность, активность, соединение, биораспределение и время полужизни в крови. Однако воздействие гликозилирования интерферона бета на данные свойства не были определены в полной мере.



1.5.2 Письменная сводка фармакологии

Интерфероны представляют собой цитокины, которые содействуют противовирусной, антипролиферативной и иммуномодулирующей активности под влиянием вирусной инфекции и других биологических возбудителей. Различают три основные интерфероны: альфа, бета и гамма. Интерфероны альфа и бета образуют тип I интерферонов, а интерферон гамма тип II. Данные интерфероны имеют суперпозиционную, но четко выраженную биологическую активность.

Интерферон бета влияет на свой биологический эффект путем присоединения к специальным рецепторам на поверхности человеческих клеток. Данная связь стимулирует сложный каскад внутриклеточных событий, который приводит к проявлению многочисленных вызванных интерфероном ген продуктов и маркеров. Они включают в себя 2’, 5’-олигоаденилат синтетаза, (бета)2 микроглобулин и неоптерин. Данные продукты были исследованы в сыворотке и клеточных секциях крови, взятой у пациентов, которым давали АВОНЕКС® и Синновекс™.

Специальные, вызванные интерфероном белки и механизмы, при которых интерферон бета-1а влияет на свою эффективность в лечении рассеянного склероза, не были определены полностью. Клинические исследования, проведенные в ходе лечения рассеянного склероза пациентов, показали, что уровни интерлейкина 10 (ИЛ-10) в цереброспинальной жидкости были увеличены у пациентов, которым вводили интерферон бета-1а по сравнению с плацебо. Уровни ИЛ-10 сыворотки крови были увеличены в течение 48 часов после внутримышечного (в/м) введения интерферона бета-1а и оставались превышенными в течение 1 недели. Однако связи между абсолютными уровнями ИЛ-10 и исходом болезни рассеянного склероза установлено не было.





Поделитесь с Вашими друзьями:
  1   2   3


База данных защищена авторским правом ©uverenniy.ru 2019
обратиться к администрации

    Главная страница