Баранцева Ольга Владимировна


Определение стабильности кормовой добавки Кератопептид в процессе хранения



страница4/9
Дата06.06.2016
Размер1.96 Mb.
ТипДиссертация
1   2   3   4   5   6   7   8   9

2.2.3 Определение стабильности кормовой добавки Кератопептид в процессе хранения
В процессе разработки готовых форм препаратов устанавливаются сроки годности и условия их хранения, которые отражаются в СТО.

Основанием заявляемых сроков годности готовых продуктов считаются результаты долгосрочных испытаний их стабильности.

Согласно статьям Государственной Фармакопеи XI термин «срок годности» определяет время, в течение которого лекарственные средства (кормовые добавки) сохраняют свои свойства по всем показателям качества, предусмотренным СТО.

Согласно проекту СТО на кормовую добавку Кератопептид критериями оценки качества служили следующие показатели: внешний вид, номинальный объем упаковки, показатель концентрации водородных ионов, массовая доля белка, массовая доля цистина, токсичность и стерильность.

Предложенные качественные и количественные методы контроля кератинсодержащей кормовой добавки, позволяют обеспечить оптимальный уровень качества продукта в процессе его производства и хранения.

Для установления гарантированного срока годности кормовой добавки Кератопептид и условий хранения проведены исследования стабильности препарата в условиях естественного хранения при температуре. Исследование образцов проводили через 6, 12, 18 и 24 месяца после закладки на хранение.

Результаты проведенных исследований представлены в табл. 8.

Таблица 8. Стабильность кератинсодержащей кормовой добавки Кератопептид при 25±2 °С, (n = 3)




Наименование показателя

Характеристика и норма согласно СТО

Характеристика показателя в процессе хранения

Соответствие нормам


Через 6 мес.

Через 12 мес.

Через 18 мес.

Через 24 мес.

Внешний вид

Темно-коричневая жидкость

Темно-коричневая жидкость

Темно-коричневая жидкость

Темно-коричневая жидкость

Темно-коричневая жидкость

Соответствует

рН раствора

6,7 ± 0,3

6,75±0,01

6,75±0,01

6,76±0,01

6,76±0,01

Соответствует

Номинальный объем, см3

100 + 2%

102,67±0,39

102,67±0,39

102,67±0,39

102,33±0,31

Соответствует

Массовая доля белка, мг/см3

82,0±1,0

81,80±0,40

81,80±0,40

81,60±0,30

81,40±0,20

Соответствует

Массовая доля цистина, мг/см3

5,0 ± 0,5

5,17±0,14

5,16±0,13

5,13±0,13

5,08±0,14

Соответствует

Токсичность, в тест-дозе 1см3 на мышь

Нетоксичен

Нетоксичен

Нетоксичен

Нетоксичен

Нетоксичен

Соответствует

Стерильность

Стерилен

Стерилен

Стерилен

Стерилен

Стерилен

Соответствует

Обработка результатов проведенных исследований показала, что качественные и количественные показатели кератинсодержащей кормовой добавки Кератопептид при хранении при температуре 25±2 °С в течение 24 месяцев оставались практически без изменений, т.е. разница значений не достоверна. Таким образом, установлено, что срок хранения Кератопептида в течение 2 лет не оказывает существенного влияния на свойства и не снижает качество продукта. Полученные результаты позволили включить в инструкцию по применению и СТО срок годности препарата 2 года с даты изготовления.


2.2.4 Бактериологический контроль стерильности кормовой добавки

Кератопептид
Стерильность кормовой добавки определяли в соответствии ГОСТом 28085-89 «Препараты биологические. Метод бактериологического контроля стерильности».

Из трех флаконов испытуемой серии кормовой добавки по 10 см3 объединяли, разбавляли стерильным физраствором 1:10 и производили посев в МПА, МПБ и жидкую среду Сабуро по 3 пробирки, среду Китта-Тароцци – по 2 пробирки.

Для выявления аэробов высевали по 0,5 см3 образца в одну пробирку, а для выявления анаэробов - по 1 см3.

Пробирки с посевами на всех средах, кроме среды Сабуро, выдерживали в термостате 7 суток при 37 °С, на среде Сабуро – при 21°С.

По истечении указанного срока делали пересев, за исключением посева на МПА. Пересевали пробы на те же питательные среды и в тех же объемах, что и при посеве. Вторичные посевы выдерживали 7 суток.

В результате испытания было установлено, что все испытуемые образцы были стерильными - ни в одной из пробирок визуально не было отмечено роста бактериальной и грибной микрофлоры. При микроскопическом анализе посевов микробных клеток не обнаружено. Предлагаемая нами технология обеспечивает получение стерильной кормовой добавки.

Таким образом, кормовая добавка Кератопептид, полученная на основе гидролиза шерсти овец комбинированным методом, содержащая в своем составе в качестве основных компонентов: пептиды, аминокислоты, в том числе серосодержащие, представляет собой стерильную темно - коричневую жидкость специфического запаха.
2.2.5 Изучение токсичности и ростостимулирующей активности кормовой добавки Кератопептид
Токсичность кормовой добавки определяли методом биотестирования параллельно на кроликах (кожная проба) и на беспородных белых мышах согласно ГОСТ Р-52337-2005 «Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Методы определения общей токсичности».
2.2.5.1 Изучение токсичности кормовой добавки Кератопептид

на кроликах
Изучение дермонекротического воздействия на кожу животных проводили на 5 кроликах породы шиншилла массой 2,0 – 2,2 кг. Для постановки опыта у кроликов на участке кожи размером 6х6 см в области бедра тщательно выстригали волосяной покров, на выстриженный участок кожи кроликов пластиковой лопаткой наносили кормовую добавку. На следующий день проводили повторное нанесение. В качестве контроля использовали оголенный участок кожи размером 6х6 см, на который не наносили препарат. Наблюдение за реакцией продолжали в течение 3 суток, начиная со следующего дня после повторного нанесения Кератопептида. У опытных животных не было отмечено воспалительного процесса на участках с нанесенным препаратом.


2.2.5.2 Изучение токсичности кормовой добавки Кератопептид

на белых мышах
Влияние кормовой добавки Кератопептид на пищеварительную систему теплокровных животных изучали на беспородных белых мышах массой 18-20 г.

Для этого были сформированы опытная и контрольная группы по 5 животных в каждой.

Мышам опытной группы с помощью шприца с тупой изогнутой иглой длиной 4 см вводили однократно внутрижелудочно предельно допустимый объем (1,0 см3) кормовой добавки.

Наблюдение за клиническим состоянием лабораторных животных вели в течение 3 суток. После завершения эксперимента всех животных усыпляли эфиром и вскрывали.

Влияние кормовой добавки Кератопептид на мышей оценивали по внешнему виду внутренних органов (желудочно-кишечного тракта, печени, селезенки, почек).

При проведении испытаний по определению токсичности на белых мышах было установлено, что в течение трех суток эксперимента все животные опытной и контрольной групп оставались клинически здоровыми. При вскрытии мышей опытной группы не выявлено видимых изменений внутренних органов в сравнении с контролем.

По совокупности реакций в обоих параллельных методах можно сделать вывод, что исследуемая кормовая добавка Кератопептид является нетоксичной.

Отсутствие вредного воздействия испытуемой кормовой добавки при однократном введении в желудок в большой концентрации (4000 мг в пересчете на белок на 1 кг массы животного) явилось основанием для испытания ростостимулирующих свойств различных концентраций Кератопептида на белых мышах.



2.2.5.3 Определение ростостимулирующей активности кормовой добавки Кератопептид на белых мышах
Для исследования ростостимулирующей активности кормовой добавки были сформированы 4 группы мышей массой 12-14 г, по 10 животных в каждой.

Первую группу - контрольную, кормили приготовленным гранулиро-ванным кормом из дробленого зерна. Кормовую смесь для животных второй, третьей, четвертой опытных групп готовили с добавлением препарата в пересчете на белок, соответственно, по 0,2 %, 2 %, 20 % от массы корма. Кормовую смесь насыпали в кормушки и пополняли по мере поедания. Все кормушки были снабжены поилками.

Наблюдение за животными вели в течение месяца. Взвешивание проводили через 2-3 дня.

Полученные в ходе исследований данные были обработаны статистически (табл. 9).



Таблица 9. Динамика изменения массы тела подопытных белых мышей, (n=10)



Дата взвешивания

Масса тела, г

Группа

I – контрольная

II – опытная

III – опытная

IV – опытная

X±mх

X±mх

X±mх

X±mх

14.05.2007

12,1±0,2

12,0±0,3

12,3±0,2

12,2±0,2

17.05.2007

13,7±0,2

13,6±0,2

13,6±0,2

13,8±0,2

21.05.2007

14,8±0,2

15,0±0,2

14,8±0,2

14,9±0,2

24.05.2007

15,4±0,2

15,7±0,2

15,7±0,2

15,8±0,3

28.05.2007

17,4±0,2

17,5±0,2

17,0±0,3

17,3±0,3

31.05.2007

18.2±0,2

18,4±0,3

18,2±0,3

18,1±0,2

04.06.2007

19,7±0,3

20,1±0,2

20,0±0,3

19,8±0,3

07.06.2007

21,1±0,3

22,3±0,3

21,8±0,3

21,3±0,4

11.06.2007

23,2±0,3

24,7±0,3

23,9±0,3

22,8±0,3

14.06.2007

23,4±0,2

24,8±0,2

24,1±0,2

22,7±0,2

Кормление животных приготовленной гранулированной кормовой смесью, содержащей Кератопептид, вызывало более выраженный прирост массы во второй и третьей группе по сравнению с контрольной.

При введении Кератопептида в кормовую смесь в концентрации 0,2 % и 2 % от массы корма наблюдалось статистически достоверное увеличение массы тела мышей через 4 недели от начала постановки опыта на 6 % и 3 % при td I-II = 5,0; td I-III= 2,5 (tst = 2,3)

У животных IV группы наблюдалось статистически достоверное снижение массы тела на 3 % (при td I-IV = 2,5)

Наблюдение за животными на протяжении всего опыта не выявило каких-либо изменений в поведенческих показаниях животных контрольной и опытных групп.

Животные опытных и контрольных групп на протяжении всего периода наблюдения вне зависимости от концентрации введения изучаемого препарата в кормовую смесь были подвижными и активными. Было также отмечено, что у животных четвертой группы поедаемость корма во второй половине опыта снизилась.

Действие кормовой добавки на организм мышей также оценивали при определении биохимических, гематологических показателей крови (табл. 10).

Таблица 10. Показатели крови мышей, (n=10)




Показатель крови

До применения кормовой добавки (X±mх)

Через 30 дней (X±mх)

I –

контрольная



II –

опытная


III –

опытная


IV –

опытная


I –

контрольная



II –

опытная


III –

опытная


IV –

опытная


Гемоглобин,

г/л


96,2±2,4

95,8±3,1

97,6±4,1

96,6±2,8

96,8±3,5

97,3±4,4

98,2±3,8

96,3±2,6

Эритроциты, 1012

8,6±0,4

8,1±0,2

9,1±0,5

8,9±0,4

8,4±0,5

8,6±0,5

9,2±0,6

8,9±0,3

Лейкоциты, 109

9,4±0,9

9,7±0,7

10,5±0,9

9,9±0,6

9,6±0,8

10,1±0,8

10,3±0,6

9,8±0,9

Белок, г/л

67,1±2,0

66,9±1,5

68,1±2,3

67,8±1,8

67,3±1,8

67,2±1,3

68,2±2,8

67,9±1,6

Клинический анализ крови не выявил статистически значимых изменений показателей крови мышей при завершении эксперимента.

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о том, что исследуемая кормовая добавка является стерильным, нетоксичным продуктом и при использовании его в малых концентрациях оказывает стимулирующие действие на белых мышей.

Полученные положительные результаты испытания Кератопептида на лабораторных животных явились предпосылкой для изучения влияния его на продуктивные свойства пушных зверей.
2.2.6 Изучение влияния кормовой добавки Кератопептид на товарные свойства шкурок норки
2.2.6.1 Производственный опыт на убойном молодняке норок, 2007 г.
Для изучения влияния полученных кератинсодержащих кормовых добавок на товарные свойства шкурок норки в период 01.07.07 по 30.01.08 г.г. был проведен опыт в условиях ОАО «Племенной зверосовхоз «Салтыковский» Московской области.

Опыт был проведен на норках стандартного темно-коричневого окраса, рожденных в период с 30.04.07 по 04.05.07 г. Для исследований были отобраны 60 животных (самцов) и сформированы 5 групп, по 12 животных в каждой. Группы были сформированы по полу, возрасту и живой массе.

Через месяц после формирования групп к основному рациону добавляли кормовые добавки, в соответствии со схемой опыта:

Первая группа - контрольная, получавшая обычный рацион кормления, вторая, третья, четвертая, пятая группы - опытные – в рацион, которых вносили в пересчете на белок по 0,2 % и по 1 % от суточной нормы белка препараты, полученные согласно первой и третьей схемам гидролиза. Препарат вносили в корм пятидневными курсами с десятидневными перерывами четыре цикла (август- сентябрь 2007 г).

Потребление корма во всех группах было одинаковым.

Содержание переваримых питательных веществ в рационах норок всех опытных групп (на 100 ккал ОЭ, г) в августе составило: протеина – 8,7; жира – 4,5; углеводов – 4,8; в сентябре 7,9; 4,7; 5,6 соответственно. Калорийность рационов на голову в сутки в августе составила 326,4 ккал, в сентябре – 378,1 ккал. Состав и среднесуточная калорийность рационов для молодняка норок представлены в приложении 1.

Опыт состоял из трех периодов: подготовительного, учетного и заключительного.

Схема производственного опыта представлена в табл. 11.

Таблица 11. Схема производственного опыта на молодняке норок, 2007 г.


группа

 

 



 

 


Кол-во животных

 

 



 

 


кормовая

добавка


(способ

получе


ния)

 


дозировка

корм. добавки




периоды, сроки опыта


мг белка

на 1 жив-е 



% от сут.

нормы белка 



подготовительный

02.07.2007-

03.08.2007


учетный

04.08.2007-

25.09.2007


заключительный

26.09.2007-

02.10.2007

I-контрольная

 


 

12

 



 

-

 



 

-

 



 

-

 



 

ОР*


 

 

ОР

 



 

ОР

 


II-опытная

 

12

 



Схема №1

65

 


0,2


 

ОР

ОР +

КД

ОР

 



III-опытная

 

12

 


Схема №1

325


 

1,0


 

ОР

 



ОР +

КД

ОР

 



IV-опытная

 

12

 


Схема №3

65

 


0,2


 

ОР

 



ОР +

КД

ОР

 



V-опытная

 

12

 


Схема №3

325


 

1,0


 

ОР

 



ОР +

КД

ОР

 


ОР – основной рацион ОАО «Племенной зверосовхоз «Салтыковский»;

КД – кормовая добавка;

«– » – кормовую добавку в основной рацион не вносили.

2.2.6.1.1 Влияние кормовой добавки на размер шкурок норки

В течение опыта за животными вели наблюдение и один раз в месяц проводили взвешивание. Результаты измерения живой массы молодняка норок приведены в табл. 12.


Таблица 12. Результаты измерения живой массы молодняка норок, г (n=12)


Дата

взвеши-вания

 


Группа

I - контрольная

II –

опытная


III –

опытная


IV –

опытная


V –

опытная


X±mх

X±mх

X±mх

X±mх

X±mх

02.07.07

845,8±12,0

841,7±10,9

837,5±9,4

850,0±11,2

841,7±8,8

03.08.07

1795,8±25,4

1750,0±12,9

1725,0±20,9

1800.0±20,4

1795,8±13,6

03.09.07

2470,8±40,6

2404,2±20,9

2358,3±22,2

2470,8±36,8

2475,0±48,6

02.10.07

3116,7±31,8

3145,8±69,4

3062,5±60,9

3150,0±48,8

3166,7±49,7

На основании проведенного испытания кератинсодержащих добавок было установлено, что при введении в рацион в августе – сентябре препаратов в испытанных дозах, на конец опыта, наибольший прирост массы тела показали животные опытных групп IV и V, а именно 3150,0±48,8 г и 3166,7±49,7 г соответственно, против массы тела животных контрольной группы 3116,7±31,8 г. Однако отмеченное увеличение массы тела животных не является достоверной разницей td I-IV = 0,6; td I-V = 0,8 (при P0,95).

После завершения опыта и убоя животных нами был произведен замер полученных шкурок для определения влияния испытуемых образцов препаратов на размер шкурок норки (табл. 12).
Таблица 12. Результаты измерения длины и площади шкурок норки


Группы



n

Товарные свойства

длина, см

площадь, см²

X±mх



Сv, %

X±mх



Сv, %

I-контроль-ная

10

84,2±1,6

4,8


5,7


1347,2±25,4



76,2


5,7


II –


опытная

12

86,3±1,5

5,1

5,9

1380,0±24,8

81,7

5,9

III –


опытная

10

83,8±1,5

4,6

5,5

1340,0±24,6

73,8

5,5

IV-


опытная

12

86,3±1,8

5,9

6,8

1380,0±28,6

94,3

6,8

V-

опытная



12

86,4±1,3

4,2

4,9

1382,0±20,5

67,7

4,9

Как следует из материалов табл. 12, средняя площадь шкурок норки в контрольной группе составила 1347,2±25,4 см², что меньше показателей II, IV, V опытных групп, которые составили 1380,0±24,8; 1380,0±28,6; 1382,0±20,5 соответственно. Статистическая обработка полученных данных позволила сделать вывод о недостоверности полученной разницы значений td I-II = 0,9; td I-IV = 0,9; td I-V = 1,1 (при P0,95).




Поделитесь с Вашими друзьями:
1   2   3   4   5   6   7   8   9


База данных защищена авторским правом ©uverenniy.ru 2019
обратиться к администрации

    Главная страница