Влияние белка parp1 на теломеры человека



Скачать 19.68 Kb.
Дата06.06.2016
Размер19.68 Kb.
Влияние белка PARP1 на теломеры человека

Савельев Никита Валерьевич

Студент

Московский государственный университет имени М.В.Ломоносова,

Химический факультет, Москва, Россия

E-mail: nikitasavel@gmail.com
На концах хромосом всех эукариот присутствуют нуклеотидные повторы (у позвоночных TTAGGG), защищающие хромосомы от деградации и концевого слипания, - теломеры. Из-за концевой недорепликации в процессе жизни клеток с каждым актом деления теломеры укорачиваются, пока не достигнут критической длины, после чего клетка гибнет. Чтобы этого не произошло раньше времени, существует фермент теломераза, активный в большинстве раковых клеток, в половых и стволовых клетках. Это рибонуклеопротеидный комплекс, состоящий из белкового компонента TERT и теломеразной РНК TER [1].

С теломерами связан белковый комплекс, состоящий из множества белков, - шелтерин. В литературе показано, что одним из белков, ассоциированных с шелтерином, является белок PARP1. PARP1 - это поли(АДФ-рибоза)-полимераза, которая является одним из ранних сенсоров на повреждения ДНК [2]. Известно, что у долгожителей уровень активности этого белка больше, чем у обычных людей [3]. Также ингибирование PARP1 считается перспективным лечением тех типов рака, в клетках которых есть дефектные белки семейства BRCA [4].

Основываясь на этих данных, мы приняли решение получить стабильные клеточные линии человека с суперэкспрессией PARP1, проверить активность теломеразы в них, определить колокализацию PARP1 и белков шелтеринового комплекса TRF1 и TRF2, определить среднюю длину теломер в клеточной популяции и проверить, как ведут себя концы хромосом клеток в метафазе митоза. Также мы хотим получить стабильные клеточные линии, экспрессирующие малые шпилечные РНК, которые затем разрезаются специальным внутриклеточным комплексом до малых интерферирующих РНК, подавляющих экспрессию PARP1, и провести те же исследования, что и с клетками, суперэкспрессирующими PARP1.

Нами отработаны методика иммуногистохимического окрашивания белков антителами, методика мечения теломер на метафазных хромосомах (FISH), получены различные конструкции, кодирующие PARP1 и слитый с синим флуоресцентным белком PARP1. Также получены лентивирусные конструкции для экспрессии малых шпилечных РНК и стабильные клеточные линии HEK293 на их основе.


Литература
1. Collins K. The biogenesis and regulation of telomerase holoenzymes // Nature reviews. Molecular Cell Biology. 2006. Vol.7. P. 484-494.

2. PARP1 Is a TRF2-associated Poly(ADP-Ribose)Polymerase and Protects Eroded Telomeres // Molecular Biology of the Cell Vol. 17, 1686–1696, April 2006



3. Increased poly(ADP-ribose) polymerase activity in lymphoblastoid cell lines from centenarians // J Mol Med (1998) 76:346–354

4. Bryant HE, Schultz N, Thomas HD, Parker KM, Flower D, Lopez E, Kyle S, Meuth M, Curtin NJ, Helleday T (April 2005). "Specific killing of BRCA2-deficient tumours with inhibitors of poly(ADP-ribose) polymerase". // Nature 434 (7035): 913–7.


Поделитесь с Вашими друзьями:


База данных защищена авторским правом ©uverenniy.ru 2019
обратиться к администрации

    Главная страница