Окислительный стресс и пути его коррекции у больных ибс с нормальным и нарушенным углеводным обменом 03. 01. 04 биохимия 14. 03. 03 патологическая физиология



Скачать 335.11 Kb.
Дата16.07.2016
Размер335.11 Kb.
ТипАвтореферат диссертации


На правах рукописи

Макарова Марина Осеевна




ОКИСЛИТЕЛЬНЫЙ СТРЕСС И ПУТИ ЕГО КОРРЕКЦИИ У БОЛЬНЫХ ИБС С НОРМАЛЬНЫМ И НАРУШЕННЫМ УГЛЕВОДНЫМ ОБМЕНОМ
03.01.04 – биохимия

14.03.03 – патологическая физиология

Автореферат диссертации

на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук

Краснодар - 2010

Работа выполнена в государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Кубанский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (ГОУ ВПО КГМУ Росздрава)

Научные руководители: доктор медицинских наук, профессор

Быков Илья Михайлович

доктор медицинских наук, профессор

Павлюченко Иван Иванович

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук

Сторожук Александр Петрович

кандидат медицинских наук, доцент

Абарбарчук Антонина Ивановна
Ведущая организация: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Ставропольская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию», г. Ставрополь
Защита состоится 12 мая 2010 г. в 10 часов на заседании диссертационного совета Д 208.038.02 при ГОУ ВПО КГМУ Росздрава (350063, г. Краснодар, ул. Седина, д. 4, тел. (861) 262-73-75)
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО КГМУ Росздрава
Автореферат разослан «____» апреля 2010

У


ченый секретарь

диссертационного совета

профессор Л.А.Скорикова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Сахарный диабет (СД) является чрезвычайно распространенным заболеванием. По данным Всемир­ной Организации Здравоохранения, в настоящее время на планете насчитывается около 220 млн. больных СД, и их число прогрессивно растет [Д.Г.Курбатов, Р.В.Роживанов, Д.В.Приймак, 2009]. Большинство неблагоприятных эффектов СД реализуется через воздействие на сердечно-сосудистую систему [Т.Ш.Ажахангиров, 2005]. Около 80% больных СД 2 типа страдают различными сердечно-сосудистыми заболеваниями (ССЗ). Ишемическая болезнь сердца (ИБС), развивающаяся на фоне СД 2 типа, является одной из самых частых причин инвалидности и летальных исходов [М.И.Балаболкин, В.М.Клебанова, 2005]. Около 1/3 пациентов, страдающих ИБС, — больные стенокардией. Смертность среди больных стабильной стенокардией составляет ≈ 2% в год, кроме того, у 2-3% данной группы больных ежегодно диагностируют нефатальный инфаркт миокарда. [Ю.Н. Беленков, Р.Г. Оганов, 2007]. При одном и том же количестве имеющихся традиционных факторов риска ИБС смертность от ССЗ у больных СД значительно выше, чем у пациентов без СД [Л.В.Недосугова и соавт., 2007]. В связи с ранней инвалидизацией и высокой смертностью от сосудистых осложнений, СД относится к числу заболеваний, которые наносят наибольший экономический ущерб здравоохранению и социальному бюджету. [М.Ф.Калашникова, М.С.Новикова, 2009].

Течение СД и ИБС практически на всех этапах сопровождается интенсификацией процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) и развитием окислительного стресса (ОС) в той или иной мере выраженности [М.И.Балаболкин, В.М.Клебанова, 2005].

Важное значение в лечении заболеваний и профилактике их осложнений, связанных с развитием ОС, имеет своевременное и дозированное применение эффективных антиоксидантов (АО) - витаминов Е, С, липоевой кислоты и других тиолсодержащих препаратов, комбинированных антиоксидантных комплексов. Необходимо отметить, что если фармакологическая значимость, антиоксидантная активность (АОА) и механизмы антиоксидантного действия витаминов Е, С, липоевой кислоты хорошо изучены и эти препараты достаточно широко применяются в клинической практике, то значимость использования у больных ИБС и СД иных, в том числе и тиолсодержащих препаратов (глутатиона, N-ацетилцистеина, таурина) до последнего времени недооценена и детально не исследована [М.И.Балаболкин, В.М.Клебанова, 2005]. Также нет полноценной характеристики антиоксидантных или прооксидантных эффектов различных фармакологических средств, традиционно используемых в базовых схемах лечения ИБС и СД. Особенно это касается группы сахаропонижающих фармпрепаратов, производных сульфонилмочевины, в состав которых входит сера или тиогруппа.

Цель работы: провести сравнительный анализ выраженности оксидативных изменений в организме больных ИБС с нормальным и нарушенным углеводным обменом, а также оценить возможности их коррекции с использованием тиосодержащих препаратов.

Задачи исследования


  1. Проанализировать выраженность дисбаланса в системе про-/антиоксиданты у больных ИБС без нарушений углеводного обмена и больных ИБС в сочетании с нарушенным углеводным обменом, определив роль гипергликемии, дислипидемии и тиолового звена антиоксидантной системы (АОС) в развитии ОС.

  2. С учетом полученных данных определить патобиохимические и патофизиологические особенности развития и течения ОС у больных изучаемых групп в зависимости от стажа заболевания и степени дисбаланса в системе про-/антиоксиданты, определить алгоритм диагностики и дать рекомендации по способам его фармкоррекции.

  3. Определить динамику основных показателей АОС и ПОЛ у больных ИБС с нормальным и нарушенным углеводным обменом на фоне проводимой терапии по традиционным схемам (кардиотропные и сахароснижающие препараты).

  4. Оценить в модельных тест-системах in vitro АОА тиосодержащих препаратов (Глютатион Формулы, дибикора, авандии), а также основных лекарственных средств традиционной терапии ИБС в сравнительном аспекте.

  5. Установить ex vivo влияние тестируемых лекарственных средств и парафармацевтиков в различных дозировках на показатели перекисного окисления биомолекул и состояние системы антиоксидантной защиты (АОЗ) эритроцитов и плазмы крови у больных ИБС без нарушений углеводного обмена и больных ИБС в сочетании с нарушенным углеводным обменом.

Научная новизна

В работе с использованием эксклюзивных методов тестирования системы про-/антиоксиданты определены ведущие патобиохимические и патофизиологические механизмы развития ОС у больных ИБС с нормальным и нарушенным углеводным обменом.

Проведен всесторонний анализ общего уровня тиолсодержащих веществ крови, как ведущего звена АОС, у больных ИБС с нормальным и нарушенным углеводным обменом, установлена роль гипергликемии и дислипидемии в развитии ОС и его осложнений.

Исследовано с помощью интегральных методов диагностики влияние традиционных схем лечения кардиотропными и сахаропонижающими препаратами на показатели про-/антиоксидантной системы у больных ИБС с нормальным и нарушенным углеводным обменом.

Впервые с помощью биохимических и биофизических методов в модельных тест-системах in vitro изучена АОА тиосодержащих препаратов (Глютатион Формулы, дибикора, авандии), а также основных лекарственных средств, используемых в традиционной терапии ИБС и СД.

Впервые с помощью интегральных методов диагностики ОС изучены показатели АОА крови больных ИБС с нормальным и нарушенным углеводным обменом при применении ex vivo различных дозировок тиосодержащих препаратов (авандия и дибикор) и комбинированных антиоксидантных средств (Глютатион Формула).



Практическая значимость работы

Разработан алгоритм диагностики дисбаланса в системе про-\антиоксиданты у больных с ИБС и СД, определены наиболее значимые параметры оценки уровня ОС. Установлены особенности развития и течения ОС у больных ИБС с нормальным и нарушенным углеводным обменом. Определена динамика показателей перекисного окисления биомолекул и системы АОЗ у больных ИБС с нормальным и нарушенным углеводным обменом на фоне приема различных лекарственных средств, входящих в основные схемы лечения больных ИБС и СД. Экспериментально и клинически показаны модулирующие возможности тиосодержащих АО (фармацевтиков и парафармацевтиков) в коррекции ОС при ИБС и СД и их дозозависимые эффекты. Результатом работы стало патогенетическое обоснование использования тиосодержащих препаратов в комплексе с традиционной терапией в качестве способа коррекции нарушений показателей про/-антиоксидантной системы, повышения АОЗ миокарда у больных ИБС с нормальным и нарушенным углеводным обменом, что позволит сократить число госпитализаций, а также сроки пребывания больных в стационаре.



Положения, выносимые на защиту

  1. Течение ишемической болезни сердца и сахарного диабета сопровождается дисбалансом в системе про-/антиоксиданты в сторону превалирования прооксидантного звена, который наиболее выражен в период обострения заболеваний и у больных со стажем ИБС и СД более 5 лет.

  2. Гипергликемия значительно увеличивает скорость развития ОС и его осложнений у больных ИБС на фоне сопутствующего СД.

  3. Проводимая параллельно с традиционной кардиотропной терапией коррекция нарушений углеводного обмена сахароснижающими препаратами, диетотерапией у больных ИБС с нарушенным углеводным обменом позитивно влияет на показатели про-/антиоксидантной системы и, как следствие, на течение заболевания в целом.

  4. Для нормализации окислительно-восстановительного гомеостаза в организме больных ИБС с нормальным и нарушенным углеводным обменом и ограничения прогрессирования болезни требуется применение в комплексной терапии у данных групп больных АО прямого и косвенного действия.

  5. Исследуемый в работе тиолсодержащий препарат Глютатион Формула обладает прямым антиоксидантным действием, которое подтверждено в тест-системах in vitro и ex vivo. У дибикора и авандии in vitro и ex vivo не установлено выраженного прямого антиоксидантного или антирадикального эффекта.

Апробация работы

Основные положения работы представлялись и обсуждались на научно-практической конференции молодых ученых и студентов Юга России «Медицинская наука и здравоохранение» (Анапа, 2008); на IV съезде Российского общества биохимиков и молекулярных биологов (Новосибирск, 2008); на 6-ой международной научно-практической конференции «Достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины» (Астрахань, 2008); научно-практической конференции «Актуальные проблемы ТЭС-терапии» (Санкт-Петербург, 2008); на XIV Международном конгрессе по реабилитации в медицине и иммунореабилитации (г.Тель-Авив, 2009).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 8 работ, из них 2 в журналах, рекомендованных ВАК.

Объем и структура работы

Диссертация изложена на 181 странице машинописного текста, который включает 10 таблиц и 45 рисунков. Работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, 3 глав, отражающих результаты собственных исследований и их обсуждение, заключения, выводов, списка литературы, содержащего 113 отечественных и 115 иностранных источников, и приложения.



Содержание работы

Материалы и методы исследования

В настоящей работе произведена оценка клинико-лабораторных и биохимических показателей у 110 больных ИБС с нормальным (n=52) и нарушенным (n=58) углеводным обменом (табл. 1), находящихся на лечении в кардиологическом отделении №2 Краснодарского городского центра скорой медицинской помощи. Среди обследованных больных в I группе преобладали женщины - 33 (63%), во II группе мужчины - 31 (53%). Контрольную группу составили условно здоровые добровольцы (n=23).

Таблица 1

Количество и средний возраст обследованных больных по нозологиям


Нозология

Количество больных, человек, (%)

Средний возраст, лет

ИБС с гипергликемией

(группа I)



52 –(47%),

жен 33 чел, муж 19 чел



70,6±1,14

ИБС без гипергликемии

(группа II)



58 – (53%),

Жен –27 чел, муж 31 чел



70,8±1,2

Проводимое клиническое обследование больных в стационаре включало в себя: объективный осмотр, измерение артериального давления, регистрацию ЭКГ, ЭХО-КГ, общеклинические лабораторные исследования: ОАК, коагулограмма, биохимический анализ крови с определением трансаминаз, электролитного состава крови, уровня гликемии, концентрации белка, билирубина, креатинина, мочевины, липидов.

Критериями отбора больных были: 1) наличие дестабилизации стенокардии напряжения при поступлении; 2) наличие артериальной гипертензии не более 2 степени (систолическое артериальное давление 160–179 мм рт. ст. и/или диастолическое артериальное давление 100–109 мм рт. ст.); 3) отсутствие обострений сопутствующих заболеваний; 4) добровольное согласие на участие в исследовании.

Объектом исследования явилась венозная кровь, стабилизированная гепарином. Исследования проводились нами в день забора материала. Определение необходимых параметров в эритроцитах и плазме осуществляли в первые сутки поступления больных в стационар и на 5-7-й день терапии (после клинической стабилизации стенокардии на фоне проводимой терапии).

В работе также были изучены различные показатели про/-антиоксидантной системы крови больных ИБС с нормальным и нарушенным углеводным обменом с использованием общепринятых и модифицированных на кафедре фундаментальной и клинической биохимии КГМУ методик по следующему алгоритму диагностики (табл. 2 и 3):

Таблица 2.

Алгоритм диагностики окислительного стресса у больных ИБС с нормальным и нарушенным углеводным обменом.


Исследуемый показатель

Оборудование

Методики исследования

Единицы измерения

Антиоксидантная активность плазмы крови

Анализатор АОА «Яуза ААА -01»

(Россия)


А. А. Басов и соавт., 2006

нА*с

Активность каталазы (КАТ)

Спектрофотометр

СФ-46 (Россия)



R. Beers и соавт., 1952 в модификации И.И. Павлюченко и соавт., 2006

усл.ед.акт.

Активность супероксид-дисмутазы (СОД)

Спектрофотометр

СФ-46 (Россия)



В. А. Костюк и соавт., 1990 в модификации И.И. Павлюченко и соавт., 2006.

усл.ед.акт.

количество тиоловых групп

Спектрофотометр

СФ-46 (Россия)



В. Н. Орехович, 1977

опт. ед

максимум вспышки хемилюминесценции (ВХЛ)

Люминотестер

ЛТ-1 (Россия)



И. И. Павлюченко, А. А. Басов и соавт., 2003

усл.ед.

площадь ВХЛ

уровень продуктов, реагирующих с тиобарбитуровой кислотой (ТБК-РП) в плазме

Спектрофотометр

СФ-46 (Россия)



Ушкалова В.Н. и др., 1993

опт. ед

уровень ТБК-РП эритроцитов

Спектрофотометр

СФ-46 (Россия)



Стальная И.Д., Гаришвили Т.Г., 1977

опт. ед

Примечание: нА*с - наноампер в секунду; усл.ед.акт. – условные единицы активности; опт.ед.- оптические единицы; усл.ед. – условные единицы

Таблица 3.



Расчетные показатели оценки дисбаланса системы про- /антиоксиданты у больных ИБС с нормальным и нарушенным углеводным обменом.


Расчетные показатели

Формула расчета

Единицы измерения

соотношение активности каталазы (КАТ) и супероксиддисмутазы (СОД)

KAT\СОД

Единицы соотношения

суммарное количество продуктов окислительной модификации биомолекул

-тиобарбитуровое число (ТБЧ)



ТБЧобщ = ТБЧэр. +ТБЧэр. Ind + ТБЧпл.

Оптические единицы

коэффициент окислительной модификации биомолекул эритроцитов (КОМБэр)

КОМБэр. = (ТБЧэр. + ТБЧэр. Ind) × (Eд-sh-гр. - Ei-sh-гр.) × 100

(Павлюченко И.И., Басов А.А., Федосов С.Р. Патент на изобретение № 2236008)



Окислительные единицы активности (ОЕА)

Примечание: ТБЧэр.– тиобарбитуровое число эритроцитов; ТБЧэр. Ind тиобарбитуровое число эритроцитов после индукции перекисного окисления; ТБЧпл. – тиобарбитуровое число плазмы крови; Eд-sh-гр - показатель среднего количества тиоловых групп гемолизата у практически здоровых людей; Ei-sh-гр количество тиоловых групп гемолизата обследуемого человека.

Статистическую обработку проводили с использованием компьютерной программы Microsoft Office Excel, 2007.

Кроме того, объектом исследования явились изучаемые в тест-системах in vitro следующие фармпрепараты, использованные в традиционной схеме лечения, а также витамины и парафармацевтики, применение которых целесообразно в плане коррекции метаболических нарушений, вызванных ОС у больных с ССЗ и СД: эгилок и коронал - селективные бета1-адреноблокаторы без собственной симпатомиметической активности; кораксан - антиангинальный препарат, нитросорбид - антиангинальное средство; диабетон МВ - пероральное гипогликемическое средство, производное сульфонилмочевины II поколения; сиофор - метформин - бигуанид, гипогликемическое средство для перорального приема; авандия - росиглитазон - относится к сахароснижающим препаратам из группы тиазолидиндионы; парафармацевтики дибикор – метаболическое средство и Глютатион Формула - представитель комплексных антиоксидантных средств, ключевыми компонентами которого являются серосодержащие АО.

Вышеперечисленные лекарственные препараты исследованы с использованием тест-систем (табл. 4), модифицированных, разработанных и апробированных на кафедре фундаментальной и клинической биохимии КГМУ.

Таблица 4

Определение АОА фармпрепаратов и парафармацевтиков в модельных тест-системах

Тест-система

Методики исследования

Исследуемый показатель

№№

Состав

1

2

3

4

1

элюент с ортофосфорной кислотой

измерение электрического тока, возникающего при окислении исследуемого вещества (или смеси веществ), вносимого в тест-систему, на поверхности рабочего электрода при определенном потенциале и сравнении полученного сигнала со стандартом

(Басов А.А.  и соавт., 2006)



АОА, нА*с

2

раствор люминола в трис-НCl -буфере

определение интенсивности процессов свободнорадикального окисления при помощи внесения исследуемого вещества в тест-систему на фоне индуцированной люминол-зависимой хемилюминесценции.

(Павлюченко И.И., Басов А.А., Федосов С.Р. Патент на полезную модель № 54787).



Максимум и площадь ВХЛ, усл.ед.

3

водно-спиртово-масляная смесь (индукторы СРО ионы Fe2+ и УФО)

определение степени ингибирования липидов в мицеллярных структурах тестируемым компонентом на фоне пролонгированной индукции перекисного окисления путем внесения в тест-систему Fe2+ и последующего пролонгированного облучения полученной реакционной смеси УФ.

(Павлюченко И.И., Басов А.А., Федосов С.Р. Патент на изобретение № 2182706)



АОА,

%-ингибирования перекисного окисления, Q-ЕД



1

2

3

4

4

водно-спиртово-масляная смесь (индукторы СРО Fe2+ и H2O2)

определение степени ингибирования липидов в мицеллярных структурах тестируемым компонентом на фоне однократной индукции перекисного окисления путем внесения в тест-систему Fe2+ и перекиси водорода (Павлюченко И.И., Басов А.А., Федосов С.Р. Патент на изобретение № 2182706)

АОА,

%-ингибирования перекисного окисления, Q-ЕД



Также для изучения возможного модулирующего влияния на антиоксидантный потенциал крови и организма в целом при всасывании из кишечника или в/в введении фармпрепаратов и парафармацевтиков, применяемых для лечения ИБС и СД, измеряли биохимические маркеры ОС плазмы крови исследуемых групп больных до инкубации и после инкубации крови с лекарственными препаратами. Исследования про-/антиоксидантных показателей биоматериала проводили согласно представленному выше алгоритму диагностики (табл. 2 и 3).

Результаты собственных исследований и их обсуждение

Анализ полученных данных выявил у всех обследованных больных наличие значительных сдвигов в системе про-/антиоксиданты в сторону первого звена в момент максимально выраженной дестабилизации стенокардии (табл. 5). При этом развитие ОС у больных ИБС без нарушений углеводного обмена сопровождается преимущественно увеличением показателей прооксидантного звена (повышение максимума ВХЛ на 520% и площади ВХЛ на 375%) и накоплением в крови продуктов окислительной модификации биомолекул (увеличение ТБЧ плазмы на 180%, ТБЧ эритроцитов на 64% и ТБЧ общее на 76%). Однако у больных ИБС с сопутствующим СД отмечен намного более выраженный дисбаланс в окислительно-восстановительных процессах в сторону активации ПОЛ и СРО (повышение максимума ВХЛ на 730% и площади ВХЛ на 486%; увеличение ТБЧ плазмы на 310%, ТБЧ эритроцитов на 81% и ТБЧ общее на 104%), а также угнетение показателей системы АОЗ, проявляющееся снижением параметров основных ее показателей (АОА плазмы на 37%, SH-группы на 28%, КАТ на 70%, СОД на 49%, КАТ/СОД на 40%), которые достоверно отличались от показателей контроля



Таблица 5

Динамика показателей СРО в крови больных ИБС с нормальным и нарушенным углеводным обменом на фоне традиционного лечения в стационаре.




Контроль

I группа до лечения

I группа на 6 сутки терапии

II группа до лечения

II группа на 6 сутки терапии

АОА плазмы, нА*с

16,0 ± 0,3

10,1±0,4*

10,8±0,4*

11,9±0,4*

10,9±0,5*

Максимум ВХЛ, усл.ед

0,24±0,02

2,02±0,17*

1,25±0,11*

1,50±0,19*

0,76±0,09*

Площадь ВХЛ, усл.ед

0,75±0,05

4,38±0,41*

2,03±0,17*

3,55±0,51*

0,97±0,09*

ТБЧ плазмы,

опт.ед

0,10±0,01

0,41±0,02*

0,28±0,01*

0,28±0,01*

0,19±0,01*

ТБЧ эритроцитов, опт.ед

0,92±0,03

1,67±0,04*

1,27±0,02*

1,51±0,03*

1,28±0,02*

ТБЧ общее,

опт.ед

1,02±0,04

2,09±0,04*

1,56±0,03*

1,80±0,03*

1,48±0,03*

SH-гр, опт.ед

0,53±0,01

0,38±0,01*

0,45±0,01*

0,45±0,01*

0,48±0,01*

КАТ, усл.ед.акт

2,57±0,19

0,78±0,02*

0,89±0,01*

0,88±0,02*

0,89±0,02*

СОД усл.ед.акт

0,29±0,01

0,15±0,01*

0,16±0,01*

0,17±0,01*

0,17±0,01*

КОМБэр, ОЕА

0,11±1,09

21,3±1,86*

6,07±0,74*

7,51±0,64*

2,37±0,6

KAT\СОД

9,05±0,83

5,44±0,14*

5,68±0,07*

5,07±0,4*

5,2±0,11*

Примечание. * - р<0,05 в сравнении с контрольной группой

На фоне проводимой традиционной терапии в стационарных условиях при стабилизации стенокардии и нормализации уровня глюкозы крови отмечено значительное снижение оксидативной нагрузки (более выраженное у больных с сопутствующей гипергликемией) и некоторая коррекция показателей системы АОЗ крови в сторону повышения ее функциональных резервов (табл. 5), особенно у больных I группы (достоверное снижение максимума ВХЛ на 35% и площади ВХЛ на 182%, повышение количества SH-групп на 18% и активности КАТ на 14%).

Расчетный интегральный показатель ОС – КОМБэр, наиболее объективно отражающий изменения в про/-антиоксидантной системе и показывающий уровень ОС, подтверждает не только более существенные нарушения в системе АОЗ у больных I группы, но и более выраженную положительную динамику в этой системе у них на фоне лечения (снижение на 15 ОЕА). При этом показатель КОМБэр оставался все-таки достоверно повышенным и после лечения, что свидетельствует о необходимости длительного амбулаторного применения антиоксидантных препаратов после выписки из стационара под контролем уровня гликемии (рис.1).


Рис.1. Коэффициент окислительной модификации биомолекул эритроцитов (КОМБэр) у обследованных больных
Активация факторов прооксидантной направленности у больных I группы коррелировала с данными инструментальных клинических исследований (гипертрофией левого желудочка). Положительная корреляция с максимумом (r=0,36; p=0,078) и площадью ВХЛ (r=0,46; p=0,022) может указывать на вклад свободнорадикальных процессов у больных СД в ремоделирование миокарда, которое является ключевым звеном в патогенезе развития недостаточности кровообращения и прогностически неблагоприятно у таких больных. Корреляция показателей толщины стенки левого желудочка с активностью СОД отражает дисбаланс ферментного звена АОС, который наблюдается у больных как I (r=0,48; p=0,013), так и II группы (r=0,34; p=0,078), что также вносит вклад в прогрессирование сердечно-сосудистой патологии. Корреляция максимума и площади ВХЛ с показателями липидного обмена у больных I группы показывает, что у данной категории больных, наряду с дислипидемией, имеются и выраженные нарушения в системе про-/антиоксиданты в сторону преобладания реакций СРО. Такое одномоментное воздействие двух патологических факторов (дислипидемия и неконтролируемое перекисное окисление липидов) может ускорять процессы атерогенеза и способствовать наступлению ранних неблагоприятных исходов у больных I группы. Причиной более выраженной активации СРО у больных ИБС в сочетании с СД являются, прежде всего, нарушения углеводного обмена, что подтверждается отрицательными корреляциями глюкозы с АОА плазмы (r=-0,30; p=0,13) и положительными достоверными ее корреляция с максимумом (r=0,35; p=0,08) и площадью (r=0,34; p=0,09) ВХЛ, а также с ТБЧ плазмы(r=0,45; p=0,02). Данный факт является отражением окислительных нарушений в биосубстратах и, в первую очередь, в структурных и транспортных липопротеинах.

Также отмечена тенденция к положительной корреляции между прооксидатными показателями (ТБЧ и КОМБэр) и уровнем фибриногена, являющегося фактором риска при ИБС и СД и тенденция к отрицательной корреляции этого фактора свертывания крови с показателями АОС (SH-группы и СОД).



В работе было проанализировано наличие взаимосвязи между уровнем ОС и стажем заболевания, учитывая возможность более существенного истощения АОС организма при его длительном течении. Наиболее выраженная активация реакций СРО, как следует из проведенных нами исследований, наблюдается у больных I группы, имеющих стаж СД более 5 лет (КОМБэр - 25,0 ОЕА), и у больных II группы, имеющих стаж ИБС более 5 лет (КОМБэр - 8,9 ОЕА), что указывает на более выраженный дисбаланс про-/антиоксидантной системы при длительном течении заболевания и требует более активного назначения антиоксидантных препаратов у таких больных (рис.2).


Рис. 2. КОМБэр у больных ИБС с нормальным углеводным обменом в зависимости от стажа ИБС и у больных ИБС с нарушенным углеводным обменом в зависимости от стажа СД.
Учитывая особенности ведения больных с СД, которые нуждаются в дополнительной коррекции углеводного обмена, у них проанализировали назначаемую гипогликемическую терапию. Больные I группы, которым назначалась инсулинотерапия, имели наиболее выраженные нарушения в системе про-/антиоксиданты при поступлении в стационар. На фоне проводимого лечения у них помимо коррекции глюкозы крови наблюдалась наиболее выраженная положительная динамика показателей антиоксидантного звена (АОА плазмы, SH-группы) и биохимических маркеров ОС (максимум и площадь ВХЛ). Кроме того, высокие уровни максимума и площади ВХЛ наблюдались у больных ИБС с впервые выявленными нарушениями углеводного обмена, которые значительно снижались на фоне лечения параллельно с назначаемой им диетотерапией.

Однако, несмотря на многие факты, выявленные в ходе проведенного обследования, раскрывающие индивидуальные механизмы развития ОС у больных ИБС различных групп, нераскрытым и интересным остается вопрос, влияет ли проводимая терапия на основное заболевание и его метаболическую коррекцию, что отражается на окислительном гомеостазе, или применяемые препараты могут проявлять и прямой антиоксидантный эффект, то есть выступать в роли гасителей реакций СРО или перехватчиков свободных радикалов. В связи с этим в данной работе нами была изучена в условиях in vitro АОА лекарственных средств, используемых при лечении ИБС и СД (табл. 6).

Таблица 6

АОА фармпрепаратов и парафармацевтиков в модельных тест-системах с применением различных методов регистрации АОА в условиях in vitro


п\п


АОА мг/л vit C– за 100% принят 1 мг\л vit C

(тест –система 1)

Максимум ВХЛ – за 100% принят максимум ВХЛ раствора люминола

(тест - система 2)

Площадь ВХЛ – за 100% принята площадь ВХЛ раствора люминола

(тест -система 2)

АОА, Q-ЕД (УФО/Н2О2) – за 100% принята 1 Q-ЕД (13*10-5 мг/мл Ко Q)

(тест -система 3)

АОА, Q-ЕД (Fe2+/Н2О2) – за 100% принята 1 Q-ЕД (13*10-5 мг/мл Ко Q)

(тест -система 4)

1

155%

32%

61%

23%

51%

2

274%

19%

19,73%

77%

108%

3

70%

85%

93%

7%

10%

4

67%

79%

85%

28%

-

5

206%

52%

81%

118%

188%

6

70%

76%

85%

51%

72%

7

84%

83%

88%

134%

144%

8

23%

94%

86%

38%

7%

9

739%

6%

9%

115%

407%

10

30%

91%

71%

62%

36%

Примечание к таблице 6: 1. – коронал; 2-кораксан; 3-эгилок; 4-нитросорбид; 5-диабетон МВ; 6 – сиофор; 7 – вазилип; 8-авандия; 9 – Глютатион Формула;10 - дибикор

Установлено, что наибольший антиоксидантный потенциал тиосодержащих препаратов в тест-системах in vitro наблюдается у парафармацевтика Глютатион Формула. Из средств базисной терапии, изучаемых in vitro наиболее выраженным прямым антиоксидантным действием обладают следующие фармпрепараты: кораксан>коронал>диабетон МВ>сиофор

Несмотря на то, что нами не было установлено прямого антиоксидантного эффекта дибикора и авандии, все же, учитывая данные литературы, нами была предпринята попытка изучения ex vivo модулирующего антиоксидантного эффекта у данных препаратов в сравнении с антиоксидантным эффектом Глютатион Формулы.

В крови больных ИБС с нарушенным углеводным обменом, имеющих, по сравнению с больными ИБС без нарушений углеводного обмена, изначально наиболее высокие показатели, отражающие уровень ОС, под действием Глютатион Формулы, дибикора и авандии наблюдалась более значимая коррекция свободнорадикальных процессов.



Примечание к рисунку 3:

исходный показатель АОА плазмы до инкубации с исследуемым препаратом у больных I группы

исходный показатель АОА плазмы до инкубации с исследуемым препаратом у больных II группы



Рис. 3. Антиоксидантная активность плазмы у больных ИБС с нормальным и нарушенным углеводным обменом после инкубации с различными дозировками дибикора, Глютатион Формулы и авандии.
Наибольший модулирующий антиоксидантный эффект ex vivo отмечен у комбинированного парафармацевтика Глютатион Формулы, при этом выявлен четко выраженный дозозависимый эффект (рис. 3), даже в концентрации 0,05 мг/мл (по глутатиону) он достоверно повышает АОА плазмы до физиологических значений, поэтому слишком большие дозировки прямых АО (0,2 мг/мл и более) не рекомендуется применять из-за опасности возникновения побочных эффектов. Также следует отметить, что у больных ИБС нарушение углеводного обмена является отягчающим фактором в течение основного заболевания и клиническое применение АО может быть малоэффективным при недостаточной коррекции уровня сахаров.

В проведенном нами исследовании не было получено достаточно значимых данных в плане АОА дибикора и авандии, но, учитывая, что по данным литературы, их антиоксидантное действие связано с влиянием на метаболические пути в организме человека, необходимо изучение биохимических маркеров ОС в клинике до и после лечения данными препаратами на различных этапах терапии в различные сроки наблюдения больных ИБС с нормальным и нарушенным углеводным обменом, что является объектом дальнейшего нашего исследования. При этом необходимо отметить, что согласно полученным данным по АОА фармпрепаратов для достижения значимого антиоксидантного эффекта необходимо использовать более высокие по сравнению с рекомендуемыми дозировки дибикора.



Выводы:

  1. Развитие ОС у больных наблюдаемых групп в период дестабилизации стенокардии сопровождается значительным увеличением всех показателей прооксидантного звена и одновременным снижением АОЗ, но эти изменения более выражены у больных ИБС с нарушенным углеводным обменом, что показывает ведущую роль метаболических нарушений при СД в формировании ОС, значительно усугубляющих течение сердечно-сосудистой патологии и увеличивающих частоту неблагоприятных исходов.

  2. При оценке ОС с помощью интегрального показателя КОМБэр у больных ИБС с нарушенным углеводным обменом отмечена наибольшая выраженность ОС при стаже СД более 5 лет, в то время как у больных ИБС без нарушений углеводного обмена выявлена достоверная зависимость уровня ОС от длительности ИБС (стаж основного заболевания более 5 лет). Это свидетельствует о нарастающем дисбалансе про-/антиоксидантной системы по мере прогрессирования сердечно-сосудистой и эндокринной патологии.

  3. На фоне проведения традиционной терапии отмечено некоторое уменьшение дисбаланса в системе про-/антиоксиданты, в большей степени у больных I группы на фоне строгого гликемического контроля (инсулинотерапия, диетотерапия), что свидетельствует о ведущей роли гипергликемии в формировании ОС и подтверждается корреляционными взаимосвязями глюкозы с АОА плазмы (r=-0,30; p=0,13), максимумом (r=0,35; p=0,08) и площадью (r=0,34; p=0,09) ВХЛ, а также с ТБЧ плазмы(r=0,45; p=0,02).

  4. Средства традиционной терапии способны влиять на показатели ОС, что установлено в исследованиях in vitro. По выявленному антиоксидантному потенциалу фармпрепараты можно расположить следующим образом: кораксан>коронал>диабетон МВ>сиофор. Но наибольший антиоксидантный эффект в тест-системах in vitro показал парафармацевтик Глютатион Формула, являющийся комбинированным антиоксидантом прямого действия.

  5. В экспериментальных условиях при инкубации крови больных с серосодержащими парафармацевтическими (Глютатион Формула, дибикор) и фармацевтическими (авандия) препаратами установлено, что наиболее выраженным прямым дозозависимым модераторным антиоксидантным действием обладает также препарат Глютатион Формула, для которого определена оптимальная дозировка 0,05 мг/мл, что позволяет рекомендовать его для использования в комплексной антиоксидантной терапии больных с ОС.

Практические рекомендации:

  1. Для скрининга и экспресс-диагностики дисбаланса про/-антиоксидантной системы в клинике у больных ИБС целесообразно использовать биофизические (хемилюминесцентный и амперометрический) и биохимические методы, позволяющие также вести мониторинг эффективности комплексной антиоксидантной терапии. При оценке уровня ОС для прогнозирования исхода заболевания более рационально применять интегральные методы диагностики (например, КОМБэр).

  2. Для прогностической оценки риска сердечно-сосудистых осложнений у больных ИБС с нарушенным углеводным обменом перспективно использование биофизических показателей интенсивности СРО - уровня максимальной амплитуды ВХЛ и площади затухания ВХЛ, имеющих корреляционные взаимоотношения с дислипидемией и клиническими показателями ремоделирования сердца.

  3. Проведенное биохимическое исследование свидетельствует о целесообразности включения в комплекс лечебных мероприятий у больных ИБС с нормальным или нарушенным углеводным обменом парафармацевтика Глютатион Формула, обладающего антиоксидантным и антирадикальным действием.

  4. В период дестабилизации стенокардии напряжения парафармацевтик Глютатион Формула можно применять дополнительно к комплексному медикаментозному лечению по 1 капсуле 2 раза в день до еды.


Список научных работ, опубликованных по теме диссертации:

  1. Павлюченко И.И. Способ интегральной биохимической оценки уровня окислительного стресса у больных при различных патологических состояниях / И.И. Павлюченко, А.А. Басов, Е.В. Губарева, К.И. Мелконян, М.О. Макарова, Т.В. Еремина, А.Э. Моргоев // Материалы 4 съезда Рос. о-ва биохимиков и молекулярных биологов. - Новосибирск, 2008. - С. 438.

  2. *Губарева Е.А. Прогностическая значимость определения активности ферментов антирадикальной защиты у больных с острым инфарктом миокарда / Е.А. Губарева, А.Х. Каде, И.М. Быков, К.Б. Зингелевский, А.А. Басов, М.О. Макарова, В.Г. Борисенко, А.Г. Старицкий // Кубан. науч. мед. вестн. - 2008. - №3-4 (102-103). - С. 104-106.

  3. Павлюченко И.И. Сравнительная характеристика активности лекарственных антиоксидантов циклической природы / И.И. Павлюченко, А.А. Басов, С.Р. Федосов, А.Э. Моргоев, М.О. Макарова // Тез. докл. конгр. «Человек и лекарство. Краснодар-2008». - Краснодар, 2008. - С.67-68.

  4. Губарева Е.А. Динамика антиоксидантного статуса больных с острым инфарктом миокарда на фоне ТЭС-терапии / Е.А. Губарева, А.Х. Каде, А.А. Басов, В.Г. Борисенко, М.О. Макарова // Тез. докл. науч.-практ. конф., посвящ. 25-летию разработки и внедрения метода «Актуальные проблемы ТЭС-терапии». – СПб., 2008.- С. 30-32.

  5. Губарева Е.А. Изменение показателей антиокислительных ферментов на общем и локальном уровне при моделировании инфаркта миокарда у крыс / Е.А. Губарева, А.Х. Каде, А.А. Басов, А.Н. Луговой, P.O. Дамашаускас, М.О. Макарова // Фундамент. исслед. - 2008. - № 9. - С. 59-60.

  6. Губарева Е.А. Состояние системы антиокислительной защиты у больных с острым инфарктом миокарда на фоне ТЭС-терапии // Материалы 6-ой междунар. науч.-практ. конф. «Достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины» / Е.А. Губарева, А.Х. Каде, И.М. Быков, А.А. Басов, К.Б. Зингелевский, М.О. Макарова, А.Г. Старицкий, Е.А. Болдовская // Астраханский мед. журн. - 2008. - №3, прил. - С.156-158.

  7. Дыдышко Е.И. Влияние ТЭС терапии на показатели антиоксидантной активности крови у больных с острым инфарктом миокарда / Е.И. Дыдышко, Е.А. Губарева, В.Г. Борисенко, М.О. Макарова, А.А. Басов // Материалы 6 науч.-практ. конф. молодых учёных и студентов юга России / под ред. В. П. Крылова. - Краснодар, 2008. – С. 13.

  8. *Макарова М.О. Сравнительный анализ показателей системы про- /антиоксиданты у пациентов с ИБС без гипергликемии и пациентов с ИБС в сочетании с нарушением углеводного обмена / М.О. Макарова, И.М. Быков, И.И. Павлюченко. // Междунар. журн. по иммунореабилитации. – 2009. - Т.11, №1. - С.72.

* - работа, опубликована в журнале, включенном ВАК в Перечень ведущих рецензируемых научных журналов и изданий

Список сокращений

АО - антиоксиданты

СОД - супероксиддисмутаза

АОА - антиоксидантная активность

СРО – свободно радикальное окисление

АОЗ - антиоксидантная защита

ССЗ – сердечно-сосудистые заболевания

АОС – антиоксидантная система

ТБК РП - продукты, реагирующие с тиобарбитуровой кислотой

АФК – активные формы кислорода

ТБЧэр. – тиобарбитуровое число эритроцитов

ВХЛ - вспышка хемилюминесценции

ТБЧэр. Ind - тиобарбитуровое число эритроцитов после индукции перекисного окисления

ИБС – ишемическая болезнь сердца

ТБЧпл. – тиобарбитуровое число плазмы крови

КАТ – каталаза

Усл.ед – условные единицы

КОМБэр – коэффициент окислительной модификации биомолекул эритроцитов

Усл.ед.акт. – условные единицы активности

ОС - окислительный стресс

SH-группы – сульфгидрильные группы

Опт. ед. – оптические единицы

Eд-sh-гр - показатель среднего количества тиоловых групп гемолизата у практически здоровых людей

ПОЛ - перекисное окисление липидов

Ei-sh-гр - количество тиоловых групп гемолизата обследуемого человека

СД – сахарный диабет





Макарова Марина Осеевна

ОКИСЛИТЕЛЬНЫЙ СТРЕСС И ПУТИ ЕГО КОРРЕКЦИИ У БОЛЬНЫХ ИБС С НОРМАЛЬНЫМ И НАРУШЕННЫМ УГЛЕВОДНЫМ ОБМЕНОМ

03.01.04 – биохимия

14.03.03 – патологическая физиология



Подписано в печать 5.04.2010г.

Набор компьютерный. Гарнитура Times.Усл.п.л. 1,5.

Тираж 100 экз. Заказ №

Отпечатано методом ризографии.

Издательство «Адас».

Г.Краснодар, ул.Ленина, 65, оф.502

Тел.



Каталог: cms -> files
files -> Техническое задание / Technical Task в отношении пошива кожаных чехлов пассажирских кресел экономического класса для самолёта а-330
files -> Лот №1. Печатно-бланочная продукция Предлагаем изготовить
files -> Форма Коммерческого предложения на поставку печатно-бланочной продукции
files -> Электронные полнотекстовые ресурсы по
files -> Технические требования к кондиционерам салонов воздушных судов Технические требования к кондиционерам салонов
files -> Конкурсной комиссии ОАО


Поделитесь с Вашими друзьями:


База данных защищена авторским правом ©uverenniy.ru 2019
обратиться к администрации

    Главная страница