Обоснование методов функциональной диагностики животных на предубойном этапе и оценки безопасности мяса при пищевых зоонозах 06. 02. 05 ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза




страница4/4
Дата14.08.2016
Размер0.61 Mb.
1   2   3   4

Рост бактерий рода Listeria и сопутствующей микрофлоры на средах Oxford, PALCAM и ALOA

Виды питательных сред



Соотношение листерий и сопутствующей микрофлоры (Л/С)

В свежих пробах

В пробах с истекшим

сроком реализации



Oxford

6/6 (1,0)

9/8 (1,1)

PALCAM

3/2 (1,5)

9/5 (1,8)

ALOA

2/1 (2,0)

9/3 (3,0)

В ходе работы была проведена сравнительная оценка методов выявления L.monocytogenes: культурального, иммуноферментного (VIDAS LMO 2) и молекулярно-биологического (Real-Time PCR).

Данные, представленные в таблице 6, показывают, что не все Real-Time PCR-положительные результаты подтверждались культуральным методом и тестом VIDAS (LMO2), что объясняется высокой чувствительностью метода ПЦР и его возможностью выявлять патогенные листерии в пробах с низким уровнем контаминации, а также не только живые, но и нежизнеспособные L.monocytogenes, не дающие роста характерных колоний на питательных средах (K. Rantsious et al, 2008).

Таблица 6

Частота выявления L.monocytogenes различными методами

Вид


продукта

Число

образцов


Listeria monocytogenes

PCR L.mono Kit+

VIDAS LMO2

+


Культураль-ный метод

+


Мясо-свинина

(свежее)

8

3 (6%)

0

0


Готовые

мясопродукты (свежие)


17

9 (18%)

2 (4%)

2 (4%)


Готовые

мясопродукты (с истекшим сроком реализации)



25


20 (40%)


0


1 (2%)


Общее количество

50

32 (64%)

2 (4%)

3 (6%)

Наибольшая специфичность была отмечена при выявлении L.monocytogenes культуральным и иммуноферментным методами. Исследования с применением молекулярно-биологического и иммуноферментного методов характеризовались высокой автоматизацией процесса исследования и быстротой получения конечного результата. Согласно отечественным и международным нормативным документам по определению патогенных листерий положительные результаты, полученные упомянутыми методами, не являются окончательными и требуют подтверждения. При проведении исследований для подтверждения принадлежности выделенной культуры к патогенному виду L.monocytogenes использовались биохимические панели системы API Listeria (фирмы «BioMerieux»). В результате положительные результаты по выявлению L.monocytogenes в исследуемых мясопродуктах отмечались в 2-х случаях в свежих пробах и в 1-м случае в пробах с истекшим сроком реализации.

Проведенные сравнительные оценки методов по критериям чувствительности и специфичности при выявлении возбудителей трихинеллеза, сальмонеллеза и листериоза показывают, что для дифференцированного подхода к результатам исследования необходимо стандартизировать методы и питательные среды, применяемые в различных странах. Обобщение накопленного международного опыта позволит повысить диагностическую достоверность и состоятельность результатов исследования, выработать единые критерии для оценки безопасности мяса и мясопродуктов.

ВЫВОДЫ

1. Обоснованы, разработаны и применены функциональные методы исследования с использованием современной техники для проведения мониторинга физиологических параметров, обеспечивающих постоянство важнейшего показателя гомеостаза – рН крови, с целью оценки функционального состояния органов и систем, определяющих устойчивость организма свиней при транспортных нагрузках на предубойном этапе.

2. Установлены изменения величины рН крови свиней по мере возрастания дополнительных требований (нагрузки), связанной с увеличением времени и расстояния при транспортировке к убойному пункту.

При легкой нагрузке у 82,8% свиней нарушений гомеостаза не наблюдалось, в 17,2% случаев постоянство величины рН крови обеспечивалось компенсаторным напряжением буферных систем организма свиней. При умеренной нагрузке у 22,6% свиней отмечалась устойчивость гомеостаза, в 74,2% случаев наблюдались компенсаторные нарушения и в одном случае у свиноматки имели место декомпенсированные изменения величины рН крови. При тяжелой нагрузке у всех свиней по прибытии на убойный пункт наблюдались нарушения гомеостаза. В 40% случаев изменения величины рН крови носили компенсированный характер, в 60% - субкомпенсированный.

3. Мониторинг показателей кислотно-щелочного баланса свиней в условиях транспортных нагрузок по прибытии на убойный пункт выявил изменения как респираторного, так и метаболического компонентов рН крови. Напряжение углекислого газа крови, составляющее респираторный компонент рН крови, уменьшилось по сравнению с исходными значениями во всех группах животных: при легкой нагрузке – на 7,8%, при умеренной нагрузке – на 11,2%, при тяжелой нагрузке на 15,5%. Дефицит оснований, составляющих метаболический компонент рН крови, увеличился по сравнению с исходным состоянием (–0,3 ± 0,28 мэкв/л) при легкой нагрузке до –1,6 ± 0,24 мэкв/л, а при умеренной нагрузке до –1,8 ± 0,64 мэкв/л. При тяжелой нагрузке накопление кислых продуктов обмена в крови свиней увеличило дефицит оснований до –2,2 ± 0,54 мэкв/л. Различные соотношения респираторного и метаболического компонентов опреде-лили разные типы нарушений кислотно-щелочного баланса крови: у 32% свиней наблю-дался дыхательный ацидоз, у 45%-дыхательный алкалоз и у 23% - метаболический ацидоз.

4. Установлено увеличение концентрации молочной кислоты в крови свиней на 37,5% после легкой нагрузки, на 85,4% после умеренной нагрузки, на 22,4% после тяжелой нагрузки, которое сопровождалось уменьшением недоокисленных продуктов обмена в мясе в постмортальном периоде. У свиней, перенесших тяжелую нагрузку, наблюдался статистически достоверный сдвиг рН мяса в конце периода созревания в сторону оснований по сравнению с животными, перенесшими легкую нагрузку (5,55 ± 0,08 против 5,36 ± 0,06; p < 0,01).

Таким образом, функциональные исследования энергообмена у свиней установили, что увеличение транспортной нагрузки на предубойном этапе снижает резервы аэробного энергообразования, уменьшает количество кислот и гликогена в мышцах и приводит к снижению пищевой ценности мяса, приближая его к свойствам DFD – мяса, благоприятствуя развитию в нём микроорганизмов, предопределяя его меньшую стойкость при хранении.

5. Результаты бактериологического исследования мезентериальных лимфоузлов в постмортальном периоде установили, что у свиней, получивших легкую нагрузку, сальмонеллы выделены в 8% случаев, у получивших умеренную нагрузку количество контаминированных сальмонеллами проб составляло 13%, а у перенесших тяжелую нагрузку – 30%. Учитывая, что обсемененные пробы выявлены только у свиней с нарушениями гомеостаза, то исследование рН крови позволит на предубойном этапе прогнозировать вероятность контаминации мяса патогенными микроорганизмами.

6. Применение мониторинга состояния функции органов и систем, определяющих величину рН крови организма свиней на предубойном этапе, позволяет контролировать качество и безопасность мяса на начальных звеньях пищевой цепочки в процессе производства (животноводческие фермы, убойные пункты и т.д.), когда не затрачены средства и усилия на получение готового продукта, и есть возможность влиять на его качество, реализуя принцип «Здоровое животное – безопасное мясо».

7. Сравнительный анализ регламентированных методов определения возбудителей трихинеллеза при слабой инвазии выявил низкую чувствительность (46,9%) и эффективность (58,3%) метода компрессорной трихинеллоскопии. Специфичность этого метода по мере снижения уровня инвазии от 4-6; 2-4 и 0-2 личинок в 1г. мышц соответственно уменьшалась от 96,7%, 95,1% и 86,7% относительно метода группового ферментативного переваривания. Результаты исследования свидетельствуют, что наиболее эффективным методом с позиций предупреждения трихинеллеза является метод выделения трихинелл, основанный на ферментативном переваривании мышечных проб.

8. Сравнительная оценка культурального, имунноферментного (VIDAS) и молекулярно-биологического (Real-Time PCR) методов выявления сальмонелл и патогенных листерий в мясопродуктах по критерию эффективности характеризовалась наименьшим совпадением результатов между культуральным и молекулярно-биологическим методами, составлявшим соответственно 94% и 42%. Наибольшее совпадение результатов (98%) отмечали при применении культурального и иммуно-ферментного методов. Иммуноферментный метод (VIDAS) позволяет наиболее быстро обнаружить возбудителя в пищевой продукции, что и определяет возможность его применения в экспресс-диагностике сальмонеллеза и листериоза.

9. Сопоставление результатов первичных посевов на питательные среды: ALOA-агар по Оттавиани-Агости, PALCAM-агар и Oxford-агар, применяемых для избирательного роста листерий, показало, что величина соотношения листерий и сопутствующей микрофлоры (Л/С) на этих средах в пробах свежих мясопродуктов, соответственно равнялась 2,0; 1,5 и 1,0, а в пробах с истекшим сроком реализации соответственно 3,0; 1,8 и 1,1, что свидетельствуют о надежности хромогенной среды ALOA-агар по Оттавиани-Агости при идентификации патогенных штаммов листерий и служат основанием её применения для количественного определения L.monocytogenes в мясопродуктах после прямого посева.

10. Унифицированный подход к оценке международных методов и национальных стандартов, применяемых для выявления возбудителей пищевых зоонозов при ветеринарно-санитарной экспертизе мяса и мясопродуктов, на основе критериев эффективности, чувствительности и специфичности позволит обобщить опыт и повысить достоверность и состоятельность результатой исследований.
Автор признателен сотрудникам продовольственно-ветеринарной службы Краславского района Латвии за создание оптимальных условий при содружественном решении проблем, связанных с транспортировкой свиней на убойный пункт, выражает благодарность сотрудникам Института гигиены и технологии продуктов животного происхождения г. Мюнхен (Германия), а также коллективу лаборатории микробиологии и гигиены производства ГНУ ВНИИМП им. В.М. Горбатова за содействие и большую помощь при выполнении данной работы.
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Применение функциональных методов диагностики дает возможность с учетом клинической симптоматики определить компенсаторные возможности организма и представить индивидуальное клинико-функциональное экспертное заключение о состоянии животного согласно методическим рекомендациям «Оценка предубойного состояния животных на основе показателей кислотно-щелочного баланса», утвержденным Отделением ветеринарной медицины Российской академией сельскохозяйственных наук 24 июня 2009 г., и данным, изложенным в методическом пособии «Показатели кислотно-щелочного баланса и рН-метрия в практике ветеринарно-санитарной экспертизы», утвержденном методическим советом Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины (СПбГАВМ), протокол №2 от 28 февраля 2007 г.

2. Определение функциональных возможностей организма свиней сохранять свой гомеостаз на всех стадиях предубойного этапа позволяет оценить адекватность реакции органов и систем животного на воздействие повреждающих факторов, связанных с транспортировкой к месту убоя. Полученные данные положены в основу для оптимального решения о выборе места расположения убойного пункта среди близлежащих свиноводческих хозяйств Краславского района (Латвия).

3. Установленная взаимосвязь основных физиологических параметров, определяющих функцию жизнеобеспечивающих систем и органов с кислотно-щелочным балансом (КЩБ) организма животного, дает возможность определить исходную базу для мониторинга функциональных показателей в условиях воздействия повреждающих фак-торов и проведения своевременной коррекции величины рН крови. Мероприятия (отдых, кормление, содержание, уход), направленные на восстановление выявленных нарушений в предубойном периоде, в конечном итоге повышают качество и безопасность мяса.

4. Применение результатов проведенных функциональных исследований в ветеринарных учреждениях г. Санкт-Петербурга и Ленинградской области показало их эффективность при восстановлении гомеостаза у животных, оказавшихся в чрезвычайных условиях (хирургическое вмешательство, стресс, неотложные и критические состояния).

5. Опыт сопоставления результатов исследований по диагностике пищевых зоонозов, полученных в отечественных и зарубежных лабораториях ветеринарно-санитарной экспертизы, по критериям чувствительности и специфичности позволяет гармонизировать методы выявления возбудителей пищевых зоонозов в общепринятой системе международных координат и применять их при ветсанэкспертизе мяса и мясопродуктов согласно методическим рекомендациям: «Исследование мяса и мясопро-дуктов на цистицеркоз и трихинеллез» (утв. методическим советом СПбГАВМ, протокол №4 от 19.06.2001 г.), «Метод полимеразной цепной реакции» (утв. методическим советом СПбГАВМ, протокол №1 от 30.11.2005 г.), «Применение метода ПЦР в ветеринарной практике» (утв. методическим советом СПбГАВМ, протокол № 1 от 30.11.2005 г.).

6. Материалы исследований, изложенные в методических рекомендациях «Количественное определение Listeria monocytogenes в колбасных изделиях и продуктах из мяса», утвержденные Отделением ветеринарной медицины Российской академией сельскохозяйственных наук 24 июня 2009 г., определили подходы для введения количест-венных критериев выявления L. monocytogenes в соответствии с международным стандар-том ISO 11290-2, регламентирующим методы подсчета бактерий Listeria monocytogenes.

7. Результаты исследований внедрены в учебный процесс кафедры ветеринарной гигиены и санитарии Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины, кафедры ветеринарно-санитарной экспертизы Витебской ордена «Знак Почета» государственной академии ветеринарной медицины, на кафедре ветсанэкспертизы и акушерства Якутской государственной сельскохозяйственной академии, на кафедре ветеринарно-санитарной экспертизы Московского государственного университета прикладной биотехнологии.



СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Статьи в ведущих научных журналах, рекомендованных ВАК Минобразования и науки РФ

1. Нечаев А.Ю. Послеубойная диагностика трихинеллеза / А.Ю. Нечаев, С.А. Серко // Мясная индустрия. – М., 2003. – №6. – С. 40 – 42.

2. Нечаев А.Ю. Применение автоматического анализатора mini VIDAS для определения сальмонелл /А.Ю. Нечаев, Д.С. Батаева // Все о мясе.– М., 2006. – №3.– С. 35 – 36.

3. Нечаев А.Ю. Проблемы диагностики трихинеллеза в свиноводстве / А.Ю. Нечаев // Свиноводство. – М., 2006. – №4. – С.23 – 25.

4. Нечаев А.Ю. Диагностические возможности ветсанэкспертизы мяса при трихинеллезе / А.Ю. Нечаев // Все о мясе. – М., 2007. - №1. – С. 26 – 28.

5. Нечаев А.Ю. К оценке эффективности выявления патогенных листерий в пищевых продуктах / А. Ю. Нечаев // Ветеринарная патология. – М., 2007. – № 1. – С. 141 – 143.

6. Нечаев А.Ю. Оценка предубойного состояния животного / А.Ю. Нечаев // Ветеринария. – М., 2007. – №3. – С. 54 – 55.

7. Нечаев А.Ю. Применение рН-метрии в процессе ветеринарно-санитарной экспертизы мяса / А.Ю. Нечаев // Мясная индустрия.– М., 2007.– №6.– С.58 – 60.

8. Нечаев А.Ю. Применение ускоренных микробиологических методов определения патогенных листерий в мясе /А.Ю. Нечаев, Д.С. Батаева // Все о мясе. – М., 2007. - №3. – С.27 – 28.

9. Нечаев А.Ю. Экспресс-методы для определения листерий в мясе и мясных продуктах / А.В. Яшин, А.Ю. Нечаев // Мясная индустрия. – М., 2008. – №8. – С. 51 – 54.

10. Нечаев А. Ю. Сравнительный анализ результатов выявления Listeria monocytogenes в мясе и мясопродуктах /А.Ю. Нечаев // Международный вестник ветеринарии. – СПб., 2009. – № 3. – С. 13 – 17.

11. Нечаев А.Ю. Определение сальмонелл в мясе и мясных продуктах / А.Ю. Нечаев // Мясная индустрия. – М., 2009. – №7. – С. 25 – 28.




Работы, опубликованные в сборниках научных трудов,

материалах конференций и других изданиях

12. Нечаев А.Ю. Методика определения состояния вентиляции и кровотока в легких у животных с помощью оксигемометрии / А.Ю. Нечаев, М.В. Куляко // Материалы 54-й конф. молодых ученых и студентов. – СПб., 2000. – С. 64–65.

13. Нечаев А.Ю. Исследование мяса и мясопродуктов на цистицеркоз и трихинеллез / А.Ю. Нечаев. – СПб., 2001. – 32 с.

14. Нечаев А.Ю. Цистицеркоз крупного рогатого скота и свиней /А.Ю. Нечаев, С.А. Серко // Практик. – СПб., 2001. – №5. – С. 6–8.

15. Нечаев А.Ю. К диагностике сальмонеллеза / А.Ю. Нечаев // Практик. – СПб., 2003. – №3/4. – С. 14–15.

16. Нечаев А.Ю. Выявление сальмонелл на пищевых предприятиях методом ПЦР / А.Ю. Нечаев // Актуальные проблемы ветеринарной медицины: сб. научн. тр. СПбГАВМ. – СПб., 2003 – №135.– С. 78 – 79.

17. Нечаев А.Ю. Ветсанэкспертиза мяса и мясопродуктов при цистицеркозе и трихинеллезе / А.Ю. Нечаев. – СПб., 2003. – 44 с.

18. Нечаев А.Ю. Перспективы внедрения метода ПЦР в ветеринарную практику / А.Ю. Нечаев // Материалы конф. проф.-преп. состава СПбГАВМ. – СПб., 2004.– С. 92–93.

19. Нечаев А.Ю. Современные методы оценки мясной продукции в кролиководстве /А.Ю. Нечаев, С.А. Серко // Международный вестник ветеринарии – СПб., 2004 – № 2.– С.79–82.

20. Нечаев А.Ю. О дополнительных мерах по предупреждению трихинеллеза / А.Ю. Нечаев // Материалы конф. проф.-преп. состава СПбГАВМ. – СПб., 2006.– С. 74.

21. Нечаев А.Ю. К вопросу о безопасности продукции на мясном рынке России / А.Ю. Нечаев, С.А. Серко // Материалы конф. проф.-преп. состава СПбГАВМ. – СПб., 2006.– С. 99–100.

22. Нечаев А.Ю. Метод полимеразной цепной реакции / А.Ю. Нечаев, А.А. Сухинин, О.Г. Кузьмина. – СПб., 2006. – 18 с.

23. Нечаев А.Ю. Применение метода ПЦР в ветеринарной практике / А.Ю. Нечаев, А.А. Сухинин, О.Г. Кузьмина, Ю.Н. Соколова.– СПб., 2006.– 26с.

24. Нечаев А.Ю. Идентификация листерий в пищевых продуктах методом флуоресцентного анализа / А.Ю. Нечаев // Актуальные проблемы ветеринарной медицины: сб. научн. тр. СПбГАВМ. – СПб., 2006 – №138.– С. 62–64.

25. Нечаев А.Ю. О возможностях рН-метрии при ветеринарно-санитарной оценке мяса /А.Ю. Нечаев // Актуальные проблемы ветеринарной медицины: сб. научн. тр. СПбГАВМ. – СПб., 2006 – №138.– С. 64–65.

26. Нечаев А.Ю. Оценка эффективности выявления патогенных листерий в пищевых продуктах / А.Ю. Нечаев // Ветеринарный консультант. – М., 2006. – №19. – С. 21–22.

27. Нечаев А. Ю. Ускоренные методы определения сальмонелл и листерий в практике ветеринарно-санитарной экспертизы / А.Ю. Нечаев // Материалы конф. проф.-преп. состава СПбГАВМ. – СПб., 2007.– С. 57–58.

28. Нечаев А.Ю. Показатели кислотно-щелочного баланса и рН-метрия в практике ветеринарно-санитарной экспертизы / А.Ю. Нечаев. – СПб., 2007. – 15 с.

29. Нечаев А.Ю. рН-метрия на различных этапах ветсанэкспертизы мяса / А.Ю. Нечаев // Практик. – СПб., 2007. – №5. – С. 20–25.

30. Нечаев А.Ю. Применение показателей рН для ветеринарно-санитарной оценки мяса / А.Ю. Нечаев // Материалы 2-й научн.-практ. конф. «Ветеринарная медицина – теория, практика и обучение» СПбГАВМ. – СПб., 2007.– С. 48–49.

31. Нечаев А.Ю. Кислотно-щелочной баланс как метод оценки функционального состояния животного / А.Ю. Нечаев // Материалы 2-й научн.-практ. конф. «Ветеринарная медицина – теория, практика и обучение» СПбГАВМ. – СПб., 2007. – С. 46–47.

32. Нечаев А.Ю. К оценке эффективности выявления трихинелл с низким уровнем инвазии / А.Ю. Нечаев, С.А. Серко // Актуальные проблемы ветеринарной медицины: сб. научн. тр. СПбГАВМ. – СПб., 2007 – №139.– С. 78–79.

33. Нечаев А.Ю. Крупный рогатый скот: содержание, кормление, болезни, диагностика и лечение: учеб. пособие / А.Ю. Нечаев, А.Ф. Кузнецов, Г.М. Андреев и др.–СПб: Изд-во«Лань», 2007.– 624с.

34. Нечаев А.Ю. Оценка предубойного состояния животных на основе показателей кислотно-щелочного баланса / А.Ю. Нечаев. – СПб., 2008. – 17 с.

35. Нечаев А.Ю. Особенности ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясопродуктов на листериоз /А.Ю. Нечаев, А.В. Яшин // Практик. – СПб., 2008. – №5. – С. 14–19.

36. Нечаев А.Ю. Nachweis von Listeria monocytogenes in Vakuum verpackten Fleischerzeugnissen mittels PCR, VIDAS und kulturellen Methoden / А. Netschajew, M. Fredriksson-Ahomaa, B. Sperner und A. Stolle. In: Amtstierärztlicher Dienst und Lebensmittelkontrolle. – Abstractband zur 49 Arbeitstagung des Arbeitsgebietes Lebensmittelhygiene. – Garmisch-Partenkirchen, 2008. – S. 141.

37. Нечаев А.Ю. Особенности ветсанэкспертизы мясопродуктов на листериоз /А.Ю. Нечаев, А.В. Яшин // Известия СПбГАУ. – СПб., 2008. – № 11 – С. 101 – 104.

38. Нечаев А.Ю. Detection of Listeria monocytogenes in vacuum-packed meat products using real-time PCR, immunoassay and culturing / А. Netschajew, M. Fredriksson-Ahomaa, B. Sperner und A. Stolle // Archives for Food Hygiene. – 2009. – Vol. 60. – Р. 12 – 17.

39. Нечаев А.Ю. Количественное определение Listeria monocytogenes в колбасных изделиях и продуктах из мяса / А.Ю. Нечаев, Д.С. Батаева. – СПб., 2009.–12 с.

40. Нечаев А.Ю. Коррекция нарушений резистентности поросят по показателям кислотно-щелочного баланса / А.Ю. Нечаев, К.В. Племяшов // Материалы конф. проф.-преп. состава СПбГАВМ. – СПб., 2009.– С. 84 – 85.




1   2   3   4


База данных защищена авторским правом ©uverenniy.ru 2016
обратиться к администрации

    Главная страница