Обоснование методов функциональной диагностики животных на предубойном этапе и оценки безопасности мяса при пищевых зоонозах 06. 02. 05 ветеринарная санитария, экология, зоогигиена и ветеринарно-санитарная экспертиза



страница1/4
Дата14.08.2016
Размер0.61 Mb.
ТипАвтореферат
  1   2   3   4



На правах рукописи


Нечаев Андрей Юрьевич

ОБОСНОВАНИЕ МЕТОДОВ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ

ЖИВОТНЫХ НА ПРЕДУБОЙНОМ ЭТАПЕ И ОЦЕНКИ БЕЗОПАСНОСТИ МЯСА ПРИ ПИЩЕВЫХ ЗООНОЗАХ

06.02.05 – ветеринарная санитария, экология, зоогигиена

и ветеринарно-санитарная экспертиза


АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени

доктора ветеринарных наук


Санкт-Петербург – 2010

Работа выполнена на кафедре ветеринарно-санитарной экспертизы ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины»



Н
СЕРКО Сергей Афанасьевич
аучный консультант:
доктор ветеринарных наук, профессор


Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор

Алтухов Николай Михайлович

доктор ветеринарных наук, профессор



Долгов Виктор Андреевич
доктор ветеринарных наук, профессор

Мухина Нина Васильевна


Ведущая организация ФГОУ ВПО «Московский государственный университет прикладной биотехнологии»

Защита диссертации состоится «___» _____________ 2010 г. в ___ часов на заседании диссертационного совета Д 220.059.02 при ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины» по адресу: 196084, г. Санкт-Петербург, ул. Черниговская, д. 5.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины»

Автореферат разослан «___» _____________ 2010 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета Урбан В.Г.


ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Пищевые зоонозы входят в число наиболее опасных для человека и животных заболеваний. Они распространены как на территории Российской Федерации, так и в странах ближнего и дальнего зарубежья (В.П. Сергеев, 2001; Е.Н. Морозова, 2003; В.А. Долгов, 2005; Г.Г. Онищенко, 2005).

Постоянно меняющаяся ситуация, связанная с экологическими проблемами внешней среды, изменением резистентности организма животных и адаптации возбудителей к условиям обитания требует разработки новых методических подходов, отражающих динамику перемен в сообществе живых организмов и природы (В.В. Макаров, А.М. Смирнов, В.В. Сочнев, А.А. Алиев, 2004).

Работами F. Feldhusen, J. Hartung(1997), K. Fehlhaber, T. Alter (1999) показано, что изменения условий внешней среды, воздействия стрессовых и физических нагрузок снижают защитные функции организма животных и создают условия, стимулирующие жизнедеятельность патогенных микроорганизмов. В таком сообществе только за счет специфической и неспецифической резистентности живой организм способен сохранить гомеостаз и обеспечить в процессе эволюции своё видовое постоянство.

Подобные, но более кратковременные, внешние и внутренние повреждающие факторы воздействуют на животных на предубойном этапе. Установлено, что у 15 – 30 % животных в этот период снижается качество самых ценных частей туши (A. Schütte, 1994; K. Troeger, 1995; F. Feldhusen, J. Hartung, 1997; C. Ábraham, 2006).

Пункт 1.2. «Правил ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясных продуктов» (1983) определяет различное отношение к убою животных в зависимости от их состояния, однако, до настоящего времени объективные критерии для определения предубойного состояния животных отсутствуют.

В литературе имеются сведения о снижении резистентности в условиях воздействия различных повреждающих факторов, но исследования показателей гомеостаза у животных на предубойном этапе не проводились (N.N. Lizko, 1987; E. Fazio, A. Ferlazzo, 2003).

Современные требования к качеству и безопасности продуктов питания предполагают всестороннюю комплексную оценку факторов, воздействующих не только на состояние защитных функций животного, но и на здоровье человека. Наиболее значимой опасностью для благополучия населения является микробное загрязнение продуктов возбудителями инфекций с пищевым путем передачи. Предупреждение пищевых зоонозов требует разработки новых подходов и критериев в системе ветеринарно-санитарного контроля, в том числе и внедрение высокочувствительных и эффективных методов микробиологического и молекулярно-генетического анализа (Б.Д. Маккреди, Д.А. Чимера, 1999; Ю.К. Ерофеева, К.С. Янковский, Ю.Г. Костенко, 2003; С.А. Шевелева, И.М. Нитяга и соавторы, 2005; Н.Р. Ефимочкина, 2008).

С ростом распространенности и опасности пищевых зоонозов связана необходимость совместных усилий по изучению и оценке методов их выявления. Существующая в России система контроля за качеством и безопасностью продуктов животноводства существенно отличается от системы, принятой в странах ЕС и США (ФЗ №184 – ФЗ «О техническом регулировании» от 27.12.2002; СанПин 2.3.2.1078 – 01; Л.Г. Подунова, 1996; Р.К. Шарма, 1999; В.И. Белоусов, А.С. Герасимов, 2004; Е.Н. Морозова, 2005; А.Н. Иванкин, Т.Г. Кузнецова, 2005).

Для улучшения доступа животноводческой продукции России на мировой рынок требуется совершенствование и гармонизация международных и национальных методов ветеринарно-санитарной экспертизы. Оценка мяса и мясопродуктов в системе международных координат позволит более эффективно решать задачи ветеринарно-санитарной экспертизы по обеспечению стабильного благополучия и безопасности здоровья населения. Объединяющей основой содружественного решения проблем является разработка новых и использование унифицированных методов, основанных на достижениях биохимии, физиологии, патофизиологии, микробиологии, генетики и применении современного аппаратурного оснащения. Это и определяет актуальность темы. Настоящая работа является результатом выполнения научно-исследовательских тем Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины с 1998 по 2008 гг. по кафедрам оперативной хирургии и ветеринарно-санитарной экспертизы.

Цель работы. Целью проведенных исследований является обоснование методов функциональной диагностики для определения состояния животных на предубойном этапе и оценки безопасности мяса при пищевых зоонозах.

Задачи исследования. В соответствии с поставленной целью в работе были определены следующие задачи:

1. Провести комплексное исследование функции систем и органов, определяющих их способность сохранять один из показателей гомеостаза (рН крови) у животных в условиях функциональных нагрузок.

2. Определить степень и характер нарушений показателей кислотно-щелочного баланса (КЩБ) у животных при дозированных функциональных нагрузках на предубойном этапе.

3. Изучить механизмы компенсации физиологических систем и органов, обеспечивающих сохранение функционального гомеостаза;

4. По интенсивности развития нарушений установить факт наличия и степени недостаточности функциональных систем, обеспечивающих постоянство рН крови.

5. Разработать и обосновать методические подходы для проведения функциональных исследований у животных на предубойном этапе.

6. Определить взаимосвязь изменений показателей КЩБ при функциональных на-грузках с результатами бактериологических исследований мезентериальных лимфоузлов.

7. Исследовать влияние функциональных нагрузок, полученных животными на предубойном этапе, на физико-химические показатели мяса.

8. Определить эффективность методов, применяемых при экспертизе мяса на Tr. spiralis при наличии слабой инвазии.

9. Провести сравнительную оценку методов по выявлению по выявлению L. monocytogenes и сальмонелл в мясе и мясопродуктах.

10. Сопоставить результаты первичных посевов для избирательного роста листерий и определить возможности для количественного определения L. monocytogenes в колбасных изделиях и продуктах из мяса.

Научная новизна работы. Впервые на основании комплексного физиологи-ческого исследования проведена оценка состояния функции систем и органов, обеспечивающих постоянство одной из важнейших констант организма – рН крови в условиях воздействия различных повреждающих факторов внешней и внутренней среды (физических, биологических, стрессовых и др.) на различных стадиях предубойного этапа, связанного с транспортировкой животных к месту убоя. Установлено, что количественная характеристика критериев, обеспечивающих кислотно-щелочной баланс, позволяет не только выявить факт нарушения функционального гомеостаза, но и определить градации степеней недостаточности функциональных систем и органов, обеспечивающих постоянство рН крови.

Впервые показано, что при различных функциональных нагрузках, обусловленных расстоянием от фермы (хозяйства) до убойного пункта и временем транспортировки, в организме животных имеет место тесная связь между соотношением аэробных и анаэробных механизмов энергообразования и величиной рН крови.

Установлена взаимосвязь между физиологическими параметрами, характеризующими функцию систем и органов, лимитирующих окислительные процессы в организме свиней в условиях различных нагрузок, и физико-химическими и микробиологическими показателями мяса.

Впервые введены количественные и качественные критерии, позволяющие определить резистентность (устойчивость) систем и органов, опираясь на их функциональное состояние. Это даст возможность предопределить и объективизировать

экспертное заключение о состоянии животного, своевременно устранить выявленные нарушения и в конечном итоге обеспечить выпуск качественной и безопасной мясной продукции.

Предложен унифицированный подход к результатам исследований, полученных различными методами, применяемыми для выявления трихинелл при слабой инвазии, сальмонелл и L. monocytogenes на основе критериев эффективности, специфичности и чуствительности.

Определены пути совершенствования при выборе питательных сред для идентификации бактерий L. monocytogenes и их количественного определения в колбасных изделиях и продуктах из мяса в соответствии с международными требованиями.

Практическая значимость и реализация результатов работы. Установленные функциональные критерии определения состояния животных и проведение сравнительной оценки методов по выявлению патогенных листерий, сальмонелл и трихинелл в мясе позволяют:

- в комплексе с клинической картиной выявить функциональные нарушения, обеспечивающие гомеостаз, и дать объективную оценку состояния резистентности животного;

- провести коррекцию выявленных нарушений физиологических систем, обеспечивающих постоянство рН крови, у животных до убоя под контролем показателей кислотно-щелочного баланса;

- предупредить микробную контаминацию туш;

- повысить качество и безопасность мяса;

- использовать функциональные методы в практике ветсанэкспертизы на пред-убойном этапе, ввести количественную характеристику показателей, определяющих функциональное состояние животного и устанавливать не только наличие факта недостаточности той или иной физиологической системы, ответственной за гомеостаз, но и определить степень нарушений;

- обобщить опыт, выбрать и усовершенствовать методы для выявления листерий и сальмонелл, а также для определения трихинелл в условиях слабой инвазии мяса.

Применение современного технического оснащения позволяет в полевых условиях контролировать функцию физиологических систем и органов животных, обеспечивающих резистентность организма. Их применение объективизирует заключение о состоянии животных и дает возможность провести мероприятия, направленные на предупреждение пищевых зоонозов. Суммы средств, вложенных на приобретение такой аппаратуры, значительно меньше, чем суммы затрат на рабочие и лабораторные издержки при выявлении возбудителей и значительно уступают экономическим потерям, связанным с борьбой и ликвидацией последствий заболеваний.

По результатам исследования выпущены методические рекомендации:


  1. Исследование мяса и мясопродуктов на цистицеркоз и трихинеллез (утв. методическим советом Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины (СПбГАВМ), протокол №4 от 19.06.2001 г.)

  1. Метод полимеразной цепной реакции (утв. методическим советом СПбГАВМ, протокол №1 от 30.11.2005 г.)

3. Применение метода ПЦР в ветеринарной практике (утв. методическим советом СПбГАВМ, протокол № 1 от 30.11.2005 г.)

  1. Показатели кислотно-щелочного баланса и рН-метрия в практике ветеринарно-санитарной экспертизы (утв. методическим советом СПбГАВМ, протокол №2 от 28.02.2007 г.)

  2. Оценка предубойного состояния животных на основе показателей кислотно-щелочного баланса (утв. Отделением ветеринарной медицины РАСХН 24.06.2009 г.).

  3. Количественное определение Listeria monocytogenes в колбасных изделиях и продуктах из мяса (утв. Отделением ветеринарной медицины РАСХН 24.06.2009 г.).

Материалы работы использованы в учебном процессе на кафедре ветеринарной санитарии и гигиены ФГОУ ВПО СПбГАВМ, на кафедре ветсанэкспертизы и акушерства Якутской государственной сельскохозяйственной академии, на кафедре ветеринарно-санитарной экспертизы Витебской ордена «Знак Почета» государственной академии ветеринарной медицины и Московского государственного университета прикладной биотехнологии.

Результаты исследований с положительным эффектом применяются в хозяйствах Ленинградской области и госветучреждениях Санкт-Петербурга при определении предубойного состояния животных и оценке методов выявления возбудителей пищевых зоонозов по критериям чувствительности и специфичности.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на ежегодных научных конференциях профессорско-преподавательского состава Санкт-Петербургской государственной академии ветеринарной медицины (1997–2009гг.), на заседаниях методической комиссии и ученого совета СПбГАВМ (1998–2009гг.), на заседании издательских советов СПбГАВМ (2001–2009), на межкафедральных заседаниях профессорско-преподавательского состава СПбГАВМ (2000–2008), на 48-й и 49-й международных научных конференциях «Гигиена продуктов животного происхождения» (Гармиш-Партенкирхен, Германия 25–28.09.2007г. и 29.09–02.10.2008 г.).
Основные положения, выносимые на защиту:


  1. «Функциональная диагностика» – новое направление в проведении клинико-функционального заключения при оценке состояния животных на предубойном этапе.

  2. Методы функциональной диагностики обеспечивают индивидуальную оценку функционального состояния органов и систем, определяющих рН крови.

  3. Показатель гомеостаза рН крови позволяет оценить резистентность организма животного в меняющихся условиях внешней среды и воздействия различных повреждающих факторов.

  4. Имеется взаимосвязь между величиной рН крови у животного на предубойном этапе и безопасностью и качеством мяса.

  5. Информация о состоянии кислотно-щелочного баланса по поддержанию гомеостаза позволяет провести коррекцию рН крови у животных на предубойном этапе.

  6. Критерии рациональных подходов и методов ветеринарно-санитарной экспертизы при оценке безопасности мяса:

- при слабой инвазии мяса личинками Tr. spiralis;

- при выборе методов для выявления в мясопродуктах сальмонелл и L.monocytogenes



Публикации результатов исследований. По материалам диссертации опублико-вано 40 научных работ, 10 из которых связаны с методами функциональной диагностики по определению состояния животных и возможности его коррекции при воздействии по-вреждающих факторов (оперативных вмешательств, физических, химических и стрессовых нагрузок), 30 посвящены вопросам оценки безопасности мяса при пищевых зоонозах, включая 2 статьи в зарубежных изданиях. Выпущено 1 учебное пособие и 6 методических рекомендаций. В изданиях, регламентированных ВАК РФ для докторских диссертаций, опубликовано 11 работ, в которых изложены основные положения и выводы по изучаемой проблеме.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 291 странице компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы и приложений. Список литературы включает 437 источников, в том числе 210 отечественных и 227 иностранных авторов. Материал иллюстрирован 44 таблицами и 25 рисунками.


  1. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Объекты, методы и объемы исследований. Работа выполнена на кафедре ветеринарно-санитарной экспертизы ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины».

Для определения функциональных методов исследования при экспертном заключении о состоянии животного было обследовано на различных стадиях предубойного этапа 96 молодых свиней. Свиньи относились к стресс-устойчивой белой латвийской породе и принадлежали фермерским хозяйствам Краславского района. Они были представлены различным полом (40–♀ и 56–♂), подбирались по сходной зоотехнической характеристике: возрасту (от 6 до 9 месяцев) и массе (80 – 100 кг). В качестве дозированной по длительности и интенсивности функциональной нагрузки выбраны естественные физические и стрессовые факторы, действующие на животных при транспортировке к месту убоя. Животные транспортировались из ферм и хозяйств, находящихся в радиусе до 3 км; 50км и 70 км. Время в пути при этом составляло соответственно до 0,5 часа; 1,0 часа и 1,5 часа. По степени различали легкую, среднюю (умеренную) и тяжелую функциональную нагрузку и соответственно выделяли три группы свиней: I группу, получивших легкую нагрузку, составляли 35 животных; II группа, перенесших среднюю нагрузку, включала 31 животное; III группа, которым предъявлялась тяжелая нагрузка, состояла из 30 животных.

Для определения реакции физиологических систем и органов на функциональную нагрузку выбран комплекс функциональных показателей, который наиболее отчетливо характеризовали исследуемую систему или орган, отвечали цели исследования при работе с животными в естественных производственных условиях (табл.1).

Таблица 1

Комплекс функциональных показателей для характеристики физиологических систем и органов, обеспечивающих резистентность животных при транспортировке

Исследуемые физиологические реакции

Характеристика показателей


Резистентность организма

рН крови

Уровень энергообмена



HL – концентрация молочной кислоты (ммоль/л)

НGl – концентрация глюкозы (ммоль/л)

ВЕ – дефицит буферных оснований (мэкв/л)


Степень оксигенации крови

SаO2 – насыщение крови кислородом (%)

РаО2 – напряжение кислорода крови (мм рт.ст.)



Эффективность

легочного газообмена

и кровообращения


РаСО2 – напряжение углекислого

газа в крови (мм рт.ст.)

ЧД – частота дыхания в минуту

ЧП – частота пульса в минуту


Физиологические параметры регистрировали на каждой из стадий предубойного периода: перед транспортировкой (исходная стадия); после транспортировки – стадия прибытия на убойный пункт; предубойная стадия – непосредственно перед убоем. Продолжительность предубойной стадии составляла во всех группах в среднем 1 час.

Резистентность организма животных оценивали по их способности сохранять один из интегральных показателей гомеостаза – рН крови. Зависимость рН от функции систем и органов, определяющих метаболический и дыхательный компоненты, представлена в формуле (1), вытекающей из уравнения Гендерсона-Гассельбаха:
[метаболический компонент]

рН ≈ (1)

[дыхательный компонент]


Это отношение отражает важность физиологических и химических буферных систем, обеспечивающих регулировку концентрации ионов водорода. О возможностях этих систем выполнить гомеостатическую задачу в условиях функциональных нагрузок судили по показателям кислотно-щелочного баланса в артериальной крови: напряжению углекислого газа (РаСО2, мм.рт.ст), дефициту буферных оснований (ВЕ, мэкв/л), отражающих соответственно дыхательный и метаболический компоненты в формуле (1).

Показатели КЩБ определяли микрометодом Аструпа в модификации Зиггард-Андерсона на газоанализаторе АВL – 520, позволявшим одновременно регистрировать напряжение кислорода (РаО2, мм.рт.ст) в артериальной крови.

Взятие крови осуществлялось в гепаринизированные микрокапилляры (≈ 0,7 мл) или шприцы (≈ 1,0 мл). В последнем случае вместо прокола кожи выполняли пункцию ушной артерии. После взятия проб крови капилляр или шприц герметизировали. Консервация проб гепарином позволяла проводить исследование в течение 24 часов после их отбора.

Источником энергии, обеспечивающим функцию органов и систем животного, являются окислительные процессы. Достаточность обеспечения окислительных процессов кислородом до и после функциональных нагрузок определяли по показателям насыщения крови кислородом(SaO2%) и напряжения кислорода (РаО2,мм.рт.ст) в артериальной крови. Для наблюдения за динамикой изменения величины SaO2% использовали пульсоксиметр.

Интенсивность окислительных процессов и соотношение аэробных и анаэробных механизмов энергообразования в условиях воздействия функциональных нагрузок оценивали по показателям лактатметра (Lactate Scout) и глюкометра (Smart Scan), определяющих концентрацию молочной кислоты (HL, ммоль/л) и концентрацию глюкозы (HGl, ммоль/л) в крови.

Таким образом, выбранные для функциональных исследований методы базировались на применении современной доступной и распространенной в медицине, но недостаточно используемой при обследовании животных, диагностической технике. Техническое исполнение многих из приборов предусматривало их применение в полевых условиях (рН-метр, газоанализатор КЩБ, пульсоксиметр, глюкометр, лактатметр). Возможность калибровки приборов, количественный характер регистрируемых био-параметров обеспечивали сравнение полученных данных на различных стадиях предубойного этапа. Применение стандартизированной аппаратуры позволило провести унификацию подходов к анализу результатов исследования.

Результаты применения функциональных исследований в практике клинических и экспертных дисциплин в медицине (С.П. Боткин, 1888; С.С. Зимницкий, 1927; М.В. Черноруцкий, 1954; J.H. Comroe, 1957; И.И. Лихницкая, 1960), всё более широкое их использование в ветеринарии для решения задач, связанных с определением и коррекцией нарушений жизнеобеспечивающих систем и органов при неотложных состояниях и оперативных вмешательствах в условиях воздействия различных анестетиков (Б.С. Семенов, А.В. Яшин, А.Ю.Нечаев, 2000; М. Marahrens, 1994), позволили сформулировать следующие принципы применения функциональных методов для животных:

1. Функциональная нагрузка, дозированная по длительности и интенсивности, применяется там, где есть необходимость выяснения реакции физиологических систем или органа.



  1. Для учета реакции на функциональную нагрузку выбираются методы, которые наиболее отчетливо характеризуют исследуемую систему или орган.

  2. Трактовка данных функциональных исследований основана на сопоставлении нормативных (исходных) данных и физиологических параметров, полученных после функциональной нагрузки.

В целом при функциональном исследовании на различных стадиях предубойного периода у 96 животных проведена регистрация 2870 физиологических параметров.

Для определения степени контаминации сальмонеллами проводилось бактериологическое исследование мезентериальных лимфоузлов 95 туш сразу после убоя. Исследование осуществляли согласно ГОСТ 30519 – 97/ ГОСТ Р 50480 – 93 «Продукты пищевые. Методы выявления бактерий рода Salmonella», ГОСТ 21237 – 75 «Мясо. Методы бактериологического анализа» и международному стандарту ISO 6579 : 2002.

В послеубойный период было снято 475 физико-химических показателей мяса. Определение рН проводили потенциометром в водной вытяжке проб мяса по общепринятой методике с помощью лабораторного рН-метра «Статус». Для исследования брали пробы из m.semimembranosus. Измерения проводили в течение 24 часов после убоя в интервалах 0,5; 1; 2; 6; 24 часа у 95 туш. Данные измерений рН мяса в водной вытяжке сопоставляли с результатами исследований, полученных при определении рН внутри куска мяса электропотенциальным методом с помощью электрода, встроенного в клинок ножа (рН-метр «Статус-2»), применение которого позволяло исключить предварительную пробоподготовку и ускорить исследование.

С целью сравнительного анализа и оценки эффективности различных методов, используемых в отечественной и зарубежной практике ветсанэкспертизы, проводили лабораторные исследования 50 проб мяса и мясопродуктов на наличие бактерий рода Listeria и бактерий рода Salmonella. Материалом для определения листерий и сальмонелл служили образцы мясного сырья, мясных полуфабрикатов и готовых мясопродуктов. Отбор проб и их исследование на микробиологические показатели качества и безопасности оценивали по характеристикам, нормируемым ГОСТ 26668 – 85 «Продукты пищевые и вкусовые. Методы отбора проб для микробиологических анализов». В процессе работы применялись: культуральные методы с использованием хромогенных сред; иммуноферментный метод определения на автоматическом анализаторе VIDAS; молекулярно-биологический метод.

Оценка морфологических, культуральных и серологических признаков осуществлялась в соответствии с нормативными документами: ГОСТ 21237 – 75 «Мясо. Методы бактериологического анализа», ГОСТ 30519 – 97/ ГОСТ Р 50480 – 93 «Продукты пищевые. Методы выявления бактерий рода Salmonella» и ГОСТ Р 51921–2002 «Продукты пищевые. Методы выявления и определения бактерий Listeria monocytogenes». Подтверждение положительных результатов и идентификацию выделенных бактерий проводили с использованием биохимических панелей API Listeria, API 20 E – Testkit («BioMerieux») и Enterotube (ISO 6579 : 2002). Исследования выделенных культур на хромогенных средах XLD (Xylose-Lysin-Desoxycholat Agar) и ALOA (Agar Listeria Ottaviani Agosti) производства фирмы «BioMerieux» (Франция) выполняли согласно инструкциям по их применению.

Иммуноферментный метод (фермент-связанного флуоресцентного анализа) определения патогенных листерий и сальмонелл проводили на автоматическом анализаторе VIDAS с использованием наборов тестов VIDAS Salmonella (SLM) и VIDAS Listeria monocytogenes II (LMO 2) производства фирмы «BioMerieux» (Франция).

Молекулярно-биологический метод в реакции полимеразно-цепной реакции (ПЦР) использовали для индикации сальмонелл и патогенных листерий. При выполнении метода Real-Time PCR применяли праймеры (iQ-Check-Salmonella Kit; iQ-Check- Listeria monocytogenes Kit) и реагенты фирмы «Bio-Rad», Германия.

Для сравнения эффективности регламентированных методов по выявлению трихинелл при слабом заражении мяса исследовано 144 мышечных пробы. Пробы отбирали из жевательных мышц, ножек дифрагмы, межреберных мышщ, мышц живота, мышц сгибателей и разгибателей плечевого пояса инвазированной трихинеллами свиной туши. Исследования проводили согласно МУК по лабораторной диагностике трихинеллёза животных (утв. Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода России 28.10.1998 г.) и Предписания Комиссии ЕС № 2075/2005 от 5.12.2005 г.

При компрессорной трихинеллоскопии из исследуемых проб по ходу мышечных волокон вырезались срезы (56 срезов с каждой пробы) величиной с овсяное зернышко (20 мм2), которые раздавливали между стеклами компрессориума и просматривали под микроскопом при 60-кратном увеличении.

Для исследования методом переваривания в искусственном желудочном соке была использована принятая в странах ЕС в качестве стандартной методика автоматического переваривания в аппарате для выделения личинок трихинелл Trichomatic–35®. Одновременно в аппарате исследовались до 35 мышечных проб массой 1,0 г. Состав искусственного желудочного сока был следующим: медицинский пепсин – 7г., 8,5% соляная кислота – 30 мл, вода – 400мл. Время переваривания составляло 10 минут. По истечении этого времени под микроскопом исследовалось наличие личинок трихинелл на мембранном фильтре аппарата.

В целом при сравнительном анализе и оценке различных методов для выявления возбудителей трихинеллеза, сальмонеллеза, листериоза в исследуемых пробах было использовано 5 методик, принятых в отечественной и зарубежной практике ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясопродуктов.

Результаты проведенных исследований обрабатывались с использованием методов вариационной статистики на персональном компьютере с использованием программы: Microsoft Excel 2003, «БИОСТАТ». Достоверность различий показателей в сопоставляемых результатах определялась по критерию Стьюдента. Статистически значимыми считали различия при значениях р‹0,05.



Каталог: common -> img -> uploaded -> files -> vak -> 2010 -> announcements -> Veterinar -> 04-10
announcements -> Выбор лечебной тактики при панкреонекрозе 14. 01. 17 хирургия
announcements -> Камерная вокальная музыка в россии первой половины XIX века: к проблеме связей с европейской культурой
announcements -> Этапы ультрамафит-мафитового и габбро-анортозитового магматизма юго-восточного обрамления Северо-Азиатского кратона
announcements -> Научно-педагогическое обеспечение процесса информатизации общего образования 13. 00. 02 теория и методика обучения и воспитания
announcements -> Коминтерн и эволюция левого движения мексики
announcements -> Акмеологическая концепция идентификации государственных служащих
announcements -> Сотрудничество СССР со странами африки в 1960-1980-е гг.: Историческое исследование


Поделитесь с Вашими друзьями:
  1   2   3   4


База данных защищена авторским правом ©uverenniy.ru 2019
обратиться к администрации

    Главная страница