Наука о еде и питании, 2014, 5, 341-350 Научное




Скачать 386.84 Kb.
страница1/2
Дата12.06.2016
Размер386.84 Kb.
  1   2
Наука о еде и питании, 2014, 5, 341-350 Научное

Опубликовано на сайте в феврале 2014г. (http://www.scirp.org/ioumal/fnsl Исследование

http://dx.doi.org/10.4236/fns.2014.54041



Иммуномодулирующие свойства концентрированного фруктового и овощного сока, проверенные в рандомизированном, плацебо-контролируемом, двойном слепом клиническом испытании с участием здоровых добровольцев

Манфред Шмольц1, Рейнхард В. Марц23, Марко Шаудт4, Корнелия Шаудт4, Карола Лаустер4 'EDI GmbH, Ройтлинген, Германия; 2SCIRM, Фюрт, Германия; 3Technische Hochschule, Нюрнберг, Германия; 4analyze & realize GmbH, Берлин, Германия.



Email: mschaudt@analvze-realize.com

Получено 4 ноября 2013г.; пересмотрено 4 декабря 2013г.; утверждено 11 декабря 2013г.

Авторское право © 2014 Манфред Шмольц и др. Настоящая статься с открытым доступом распространяется в соответствии с лицензией «С указанием авторства», которая позволяет неограниченное использование, распространение и воспроизведение в любой среде цитат из оригинальной работы. В соответствии с лицензией «С указанием авторства» все Авторские права © 2014 зарезервированы для SCIRP, а владелец интеллектуальной собственности Манфред Шмольц и др. Авторское право © 2014 охраняется законом и SCIRP в качестве опекуна.

КРАТКИЙ ОБЗОР

В рандомизированном, плацебо-контролируемом пилотном исследовании по изучению иммуномодулирующего действия концентрированного сока, содержащего ингредиенты 80 разных фруктов, трав, грибов, масел и других (Cellagon aurum®, «CA») приняли участие 22 здоровых добровольца. 11 человек получали концентрированный сок, а другие 11 исследуемых были определены в группу плацебо. Для оценки связанных с терапией изменений ответа лейкоцитов на экспериментальную активацию иммунных клеток использовали стимулированные культуры цельной крови. Для каждого добровольца были приготовлены 5 культур непосредственно перед, во время или через 3 три после завершения 7-недельной терапии. Активность лейкоцитов определялась путем изменения уровня цитокинов в супернатантах после стимуляции в течение 48 часов (индуцированной добавлением LPS + SE-B + анти-CD28 антител). Несмотря на относительно небольшое количество добровольцев, мультиплексные анализы цитокинов показали типичный Т-образный отпечаток цитокинов, значительно увеличенный в ходе терапии с CA по сравнению с плацебо (GM-CSF, IFNγ, IL-4, IL-10, IL-17, TNFβ, во всех случаях p < 0,05). Эти предварительные результаты показывают, что препарат CA может поддерживать активацию лейкоцитов, в частности Т-лимфоцитов.

КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА

Рандомизированное плацебо-контролируемое клиническое испытание; Ex Vivo; Цитокин; Концентрат сока


  1. Введение

Травы, овощи и фрукты были тщательно исследованы на предмет защитных свойств, которые они проявляют в тканях человека. Установлено, что многие их свойства связаны с утилизацией радикалов кислорода (проверено, например [1]), хотя другие ставят под сомнение клинический эффект таких пищевых компонентов [2]. Обнаружено, что некоторые такие поглотители радикалов, а также многочисленные травяные, овощные и фруктовые субстанции обладают противовоспалительным действием (напр., [3,4]). Менее описанными являются препараты с так называемыми иммуномодулирующими компонентами, которые обычно являются основными составляющими растительных лекарственных средств, таких как рудбекия (Эхинацея). Иммуномодуляция характеризует действие вещества, поддерживающее или угнетающее активность иммунных клеток; это довольно старая концепция, которая получила широкое признание за последнее десятилетие, особенно в терапии комплексных заболеваний, таких как аутоагрессивные расстройства [5,6].

Клиническое исследование, представленное в этом издании, было разработано для решения вопроса, может ли препарат Cellagon aurum® (CA) влиять на деятельность иммунных клеток in vivo. Препарат CA – это концентрированный сок, состоящий из 80 различных натуральных продуктов (Таблица 1), таких как фруктовые соки, экстракты из овощей, грибов и трав, а также различные масла и микроэлементы (кальций, железо, коэнзим Q10,




Таблица 1. Питательная ценность Cellagon aurum.

Питательная ценность

Ежедневный прием по 20 мл CA в 260 мл воды

% RDI

Калорийность кДж/ккал

150/35




Белок г

0,7




Общие углеводы г

5,0




Сахар г

3,6




Общий жир г

0,5




Насыщенные жирные кислоты г

0,1




Полиненасыщенные жирные кислоты г

0,3




Волокна г

3,0




Натрий г

0,008




Витамины

Витамин C мг

120

150

Витамин E мг

18

150

Ниацин мг

12

75

Пантотеновая кислота мг

9

150

Витамин B6 мг

2,1

150

Витамин B2 мг

2,1

150

Витамин B1 мг

1,7

150

Фолиевая кислота мкг

200

100

Биотин мкг

75

150

Витамин B12 мкг

3,8

150

Минералы

Кальций мг

-

-

Железо мг

4,2

30

Магний мг

56

15

Цинк мг

3,0

30

Марганец мг

0,60

30

Медь мг

0,15

15

Селен мкг

8,3

15

Хром мкг

6,0

15

Молибден мкг

7,5

15







лецитин или L-карнитин). Учитывая сложность препарата и тот факт, что, по крайней мере, некоторые его компоненты точно содержат составляющие с иммуномодулирующим действием, напр., ромашка [7,8], хмель [9], виноградные косточки [10], брокколи[11], витамины [12-17] и т.д., настоящее исследование направлено именно на тестирование изменений в функционировании иммунных клеток во время приема CA. С этой целью мы выбрали тест-систему TruCulture®, так как она позволяет проанализировать активность лейкоцитов ex vivo, т.е.: после воздействия биологически активных веществ препарата CA in vivo на эти клетки [18]. Тест-система TruCulture® основана на «прикроватных клеточных культурах» и, следовательно, позволяет избежать многочисленных артефактов, частых для других способов исследования функций лейкоцитов. Это достигается путем культивирования периферических кровяных иммунных клеток непосредственно в шприце, используемом для забора крови, т.е. в их естественной среде (цельной крови). Таким образом, эти культуры могут создаваться без задержки между забором крови и началом получения культур. Кроме того, исследование деятельности иммунных клеток может выполняться без обычной подготовки лейкоцитов, что в противном случае дает дополнительную нагрузку на клетки. И наконец, изменчивость между сериями сводится к минимуму, так как вся процедура состоит из одного этапа, т.е.: забора крови. Это дает возможность получить надежные результаты с достаточно низким количеством испытуемых.

Клетки инкубировали в этих шприц-тюбиках, затем стимулировали, имитируя наличие бактериальной инфекции: бактериальный полисахарид (LPS, стимулирующий клетки врожденного иммунного ответа; [19]) комбинировали со стафилококковым энтеротоксином-B (SE-B, активирующий Т-лимфоциты антиген-специфическим образом, вовлекая врожденные антиген-представляющие клетки; [20]), а также антителами от CD28, поверхностной молекулы, которая требуется для усиления деятельности Т-клеток [21]. Такой вид активации является физиологически соответствующим триггером защитного ответа иммунных клеток.

  1. Материалы и методы

    1. План исследования

Настоящее исследование питания проводили в виде диагностического, моноцентрического, рандомизированного, двойного слепого, плацебо-контролируемого исследования с участием здоровых добровольцев в условия амбулатории в Германии (Берлине) с августа по декабрь 2012г. Влияние препарата Cellagon aurum® (CA) на изменения в ответе лейкоцитов (экспрессия цитокинов ex vivo), связанные с терапией, сравнивали с плацебо. Исследование получило одобрение Комитет по Этике г. Шарите, Берлин (Германия) и проводилось в соответствии с Хельсинской декларацией/Гонконг 1989/Сомерсет 1996г., а также с рекомендациями ICH-GCP (CPMP/ICH/135/95).

    1. Исследуемая популяция и лечение

В исследовании принимали участие двадцать два здоровых добровольца, соответствующие следующим критериям включения: возраст18 - 40 лет, некурящие с хорошим общим состоянием здоровья, подписавшие письменное согласие на участие. Основные критерии исключения: любое острое или хроническое заболевание, известные аллергии, вакцинация или хирургическое вмешательство за последние 6 месяцев до или во время клинического испытания, прием любых пищевых добавок, пре-/пробиотиков или препаратов, влияющих на иммунную систему, за 14 дней (д) до или во время исследования, установленная чувствительность к одному из компонентов препарата, а также беременность и лактация.

CA – это концентрат из 80 компонентов (Hans- Gtinter Berner GmbH & Co. KG, Германия), в качестве плацебо, сходного по внешнему виду, использовали концентрат фруктового сока, содержащий апельсиновый и яблочный сок, минеральную воду, фруктозу, яблочный экстракт, лимонную кислоту, сорбат калия, сукралозу, бета-каротин и кармин, натуральные ароматизаторы без дополнительных витаминов или минералов, по калорийности сопоставимый с препаратом CA (Hans-Gtinter Berner GmbH & Co. KG, Германия).

Исследуемых в случайном порядке распределяли в группы, получающие препарат СА или плацебо. Участники исследования получили указание принимать 10 мл препарата CA или плацебо два раза в день, смешивая его со 120 мл питьевой или минеральной воды, предпочтительно во время завтрака и обеда в течение 7 недель.

Двадцать два исследуемых соответствовали критериям включения и не нарушали критерии исключения, и были включены в исследование. Двое из 22 участников были исключены во время посещения V3 (один: из-за завышенного уровня CRP вследствие солнечного ожога; второй: по причине венозного заболевание). Для этих пациентов отсутствуют данные об эффективности во время посещения V4 и V5, так как их исключили из полного множества пациентов для анализа (FAS-популяции). Таким образом, полное множество пациентов для анализа (FAS-популяция) включает 20 пациентов (см. Рисунок 1). Так как все они придерживались протокола, то они представляют достаточное множество пациентов для анализа (VCAS-популяция).


Таблица 3. Ход исследования.

Visit purpose

V1 (1 - 7 дней до V2)

V2 (д 0)

V3 (д 4)

V4 (д 14 ± 2)




V5 (д 56 ± 2)




Скрининг

Распределение включения:

CA Плацебо

Контроль №

Контроль № 2

Конец приема через 53 дня

Контроль № 3 Окончание исследования

Кровь

X

X

X

X




X

TruCulture®




Основные

1

2




#3

Моча

X

X

X

X




X



20 исследуемых полного множества пациентов для анализа (FAS-популяции) - это 13 женщин и 7 мужчин. Все участники исследования принадлежат к европеоидной расе. По базовым характеристикам статистически значимых различий между двумя группами не было выявлено (Таблица 2).

Во время исследования участники посещали исследователя 5 раз (см. Таблицу 3: посещение V1— скрининг, посещение V2 — рандомизация и распределение исследуемого препарата; посещение V3 — на четвертый день приема исследуемого препарата; первая культура TruCulture® из клеток крови; посещение V4 — через 14 дней приема исследуемого препарата; вторая культура TruCulture® из клеток крови; посещение V5 — последнее посещение в 56 ± 2 и 3 дня после последнего приема исследуемого препарата; третья культура TruCulture® из клеток крови).



    1. Критерии оценки

Испытания Ex Vivo TruCulture®

Тест-системаTruCulture® состоит из закрытого шприца-тюбика, подробно описанного выше [18]. В двух словах, кровь забирается в эти тюбики с культуральной средой и добавлением экспериментальных стимуляторов LPS (из E. coli, O55: B5; Calbiochem,






Рисунок 1. Схема исследуемой популяции.



Таблица 2. Средние (±SD) исходные характеристики вошедшей в исследование популяции.

Исследуемая популяция




CA (n = 9)

Плацебо (n - 11)

p-значение

Возраст (лет)

27,9 ± 5.7

32,7 ± 6,9

0,107

Пол(м/ж)

3/6

4/7

1,0

Рост (см)

173,1 ± 7,2

170,4 ± 8,7

0,467

Вес (кг)

67,9 ± 7,5

62,0 ± 7,9

0,131

ИМТ кг/м2

22,6 ± 1,5

21,3 ± 1,7

0,070







Германия), SE-B (из S. aureus; Bernhard-Nocht-In- stitute, Германия), а также анти-CD28 антител (Beckmann-Coulter, Германия). В течение 15 минут после забора крови поршни шприцев-тюбиков вынимают, а тюбики помещают в сухой блок термостата (VLM GmbH, Германия), где их инкубируют в течение 48 ч при температуре 37°C. Затем культуральные супернатанты собирают и хранят при температуре ниже -18°C до отправки на сухом льду в компанию EDI GmbH, где их хранят при температуре ниже -18°C до получения концентрации для тестирования цитокинов, без прерывания холодной цепи.

Анализы цитокинов

Для определения концентрации цитокинов, хемокинов, факторов роста и других маркеров активации лейкоцитов в супернатантах культур из цельной крови TruCulture® использовали Мультиплексные аналитические профили (МАП, Myriad RBM, Остин, Техас, США). Кратко: после поступления в EDI GmbH, все образцы хранили при температуре -80°C до тестирования. Смесь из образцов и микросфер захвата тщательно смешивали и инкубировали при комнатной температуре в течение 1 часа. Затем добавляли мультиплексные коктейли из биотинилированных антител оповестителей и инкубировали в течение одного часа при комнатной температуре. Мультиплексы обрабатывали в избытке раствора стрепта- видин-фикоэритрина. Анализ проводили на приборе Luminex 100/200, а полученный поток данных интерпретировали при помощи собственного программного обеспечения для анализа данных, разработанного «Rules-Based Medicine». Неизвестные значения для каждого анализируемого вещества, находящегося в определенном мультиплексе, определяли при помощи 4-5 параметров, взвешенных и невзвешенных алгоритмов аппроксимации кривой, включенных в пакет анализа данных.

Список маркеров активации, представленный в Таблице 4, измеряли при помощи этих образцов.

Безопасность и переносимость


Цитокин человека MAP A* Цитокин человека MAP B*



ГМ-КСФ

IL-8

BDNF

IL-15

IFN-γ

IL-10

Эотаксин

IL-17

IL-2

MCP-1

ICAM-1

IL-23

IL-3

MIP-1α

IL-1α

MMP-3

IL-4

MIP-1β

IL-1β

SCF

IL-5

TNFα

IL-1ra

VEGF

IL-6

TNFβ

IL-12p40




IL-7




IL-12p70




*Список аббревиатур: см. дополнительные данные.


Как и сопутствующие переменные, переносимость Таблица 4. Измеренные маркеры.
исследуемого препарата оценивалась как исследуемыми, так и исследователями по завершении исследования. Для ее оценки использовались следующие параметры: «очень хорошо», «хорошо», «средне» или «плохо». Безопасность и переносимость препарата дополнительно оценивалась документацией побочных явлений.
  1   2


База данных защищена авторским правом ©uverenniy.ru 2016
обратиться к администрации

    Главная страница