«Исследование действия препарата «Байкал эм1» на параметры роста и развития пшеницы на ранних этапах развития в условиях слабого засоления субстрата




страница1/4
Дата14.07.2016
Размер0.68 Mb.
  1   2   3   4


Министерство образования и науки Российской Федерации

Московский государственный гуманитарный университет

имени М.А. Шолохова
Выпускная квалификационная работа

Студентки 2 курса очного отделения

факультета экологии и естественных наук

магистерской программы «Общая биология»

Бесчастновой Юлии Михайловны

на тему


«Исследование действия препарата «Байкал ЭМ1» на параметры роста и

развития пшеницы на ранних этапах развития в условиях слабого засоления субстрата»


Научный руководитель: д.б.н, проф., акад. РАЕ Аллахвердиев С.Р.

Рецензент: д.б.н., проф. Костина М.В.

Допущена к защите:____________________




Проверено «____»_________20__г. в системе «Антиплагиат».

Нарушений не обнаружено

Процент оригинального текста - _____%.

Заведующая кафедрой биологии и биотехнологии Н.О. Минькова _________________

Москва, 2013



Содержание
Список сокращений 4

Введение 5

Глава 1. ЭМ-технология как способ преодоления солевого стресса у растений, в частности, озимой пшеницы 13

1.1. Происхождение засоленных почв 13

1.2. Солевой стресс у растений 14

1.2.1. Повреждающее действие солей 14

1.2.1.1. Эффекты, проявляющиеся на клеточном уровне 15

1.2.1.2. Эффекты, проявляющиеся на уровне целого растения 17

1.2.2. Адаптации, противодействующие действию солей 18

1.3. Влияние NaCl на физические свойства почвы 19

1.4. Микроорганизмы системы почва – растение 21

1.4.1. Почва – гетерогенная среда обитания микроорганизмов 21

1.4.2. Микробное население почвы 21

1.4.3. Функциональная роль почвенных микроорганизмов 22

1.4.4. Почва – гетерохронная среда обитания микроорганизмов 25

1.4.5. Микробно-растительные взаимодействия 26

1.4.5.1. Микробно-растительные взаимодействия в ризосфере и ризоплане 26

1.4.5.2. Состав почвенной и ризосферной микофлоры по фазам развития озимой пшеницы 28

1.4.5.3. Микробно-растительные взаимодействия в филлосфере и филлоплане 30

1.4.5.4. Микромицеты филлопланы растений пшеницы 31

1.4.5.5. Специфические взаимовыгодные формы микробно-растительных взаимодействий 32

1.5. Влияние NaCl на микроорганизмы почвы 34

1.6. Препарат «Байкал ЭМ1», его влияние на систему растение-почва 35

Глава 2. Материалы и методы исследования 41

2.1. Материалы исследования 41

2.2. Методы исследования 42

Глава 3. Результаты и их обсуждение 45

Заключение 57

Выводы 59

Список литературы 60



Список сокращений

АФК – активные формы кислорода.

АБК – абсцизовая кислота

ПМ – плазмалемма

АЛГ – N-ацилированный лактон гомосерина

ВАМ – везикулярно-арбускулярная микориза


Введение

Актуальность проблемы. Современный мир с растущим населением предъявляет природе всё больше требований. Плодородных земель становится всё меньше. Некогда здоровые плодоносящие земли, в результате неграмотного применения орошения засоляются и становятся непригодными для выращивания важных сельскохозяйственных культур, в частности, для пшеницы, обладающей средней устойчивостью к засолению. Кроме того, большие площади земли засолены по естественным причинам, не зависящим от человека.

В связи с элементарной нехваткой пригодных земель, перед человечеством стоит задача использования засоленных почв.

Большой научный вклад в проблему солеустойчивости растений внесли учёные Строгонов Б.П., Генкель П.А., Удовенко Г.В..

С 80-х годов прошлого столетия, с целью индуцированного повышения устойчивости растений к различным стрессовым факторам среды, в том числе к солям, исследователи в своих экспериментах использовали фитогормоны (ауксины, цитокинины и гиббереллины), их синтетические аналоги – полистимулины и другие фитоактивные соединения (Аллахвердиев и др., 2003). При исследовании действий экстракта из листьев граната, полистимулина К, полистимулина А6 (PS-A6) на разные культуры в условиях хлоридного засоления почвы выявлены их антистрессовый, стабилизирующий и активирующий эффекты (Allahverdiev et. al., 1996; Ganieva, Allahverdiev, 1998;


Allahverdiev et. al., 1998; Allahverdiev, Kirdar, 1999).

Есть работа, посвящённая влиянию ретардантов, а именно хлорхолинхлорида, на устойчивость к NaCl яровой пшеницы (Лукман, 1991). Доказано, что предпосевная обработка семян яровой пшеницы этим веществом ограничивает поступление ионов Na+ и Cl- в корни и листья растения, уменьшает их содержание в них, в условиях сильного хлоридного засоления значительно увеличивает содержание ионов Ca2+ в листьях проростков.

Повысить солеустойчивость растений можно также физиологическими методами, как это предлагается в работе Захарина А.А. (1994) – метод импульсного засоления среды, метод проточной культуры. Предлагается также готовить растения к экстремальному засолению 0,3%-ным раствором NaCl (Гамбарова, 2008). Такое направление исследований может оказаться перспективным.

Разрабатываются селекционные методы повышения устойчивости растений к засолению. Например, солеустойчивая линия ячменя, выведенная Э. Эпштейном (США), дает урожай в условиях такой засоленности, при которой обычный ячмень погибает.

На Кубе в 80-е годы повысили соле- и засухоустойчивость картофеля и сахарного тростника, используя методы клеточной селекции. Каллусы, полученные из стеблей этих растений, последовательно выращивали на питательных средах, содержавших все большие концентрации NaCl. Выжившие в этих условиях клетки использовали для получения солеустойчивых растений (Половникова, 2010, электронный ресурс).

Ещё один вариант – привнести в геном гликофитов ряд полезных генов солеустойчивости, позаимствованных у галофитов, что возможно в развитых странах с высокоразвитой наукой, однако, не доступно для бедных и вызывает опасения в связи с недоказанностью безопасности трансгенных растений. Эксперименты в этом направлении несмотря ни на что ведутся, и в качестве примера можно упомянуть работу С.А. Садат-Нури и А. Сохансанж (2008). В растения пшеницы (Triticum aestivum L.) иранского сорта Marvdasht с помощью баллистической пушки ввели интегрированный в бинарный вектор методами генетической инженерии ген осмотина (osm). Было обнаружено усиление солеустойчивости у трансгенной линии сорта Marvdasht: проростки этой линии были способны образовывать корни на среде с высокой концентрацией NaCl (250 мМ). Устойчивость к засолению растений трансгенной линии была значительно выше, чем у нетрансформированного исходного сорта Marvdasht, и практически не отличалась от таковой у солеустойчивого иранского сорта Zarrin.

Стремление к экологизации сельского хозяйства натолкнуло на мысль попробовать применить на засоленных почвах микробиологический препарат «Байкал ЭМ1» и исследовать его действие на параметры роста и развития озимой пшеницы на ранних этапах развития.

Препарат состоит из анабиотических микроорганизмов Байкальской экосистемы, согласно литературным данным не обладает мутагенным, тератогенным, канцерогенным, аллергогенным и пирогенным действием (Блинов, 2008), что вызывает ещё большее доверие. При положительном влиянии его можно было бы использовать в комплексе с мелиорацией засоленных почв.



Степень изученности проблемы.

Первые микробные препараты стали производить после того, как


М. Бейеринк в 1888 году выделил чистую культуру клубеньковых бактерий. В настоящее время препараты активных рас клубеньковых бактерий для бобовых культур широко используются в разных странах под различными названиями.

По предложению академика С.П. Костычева и его сотрудников с 30-х годов XX столетия в СССР начали применять землеудобрительный препарат, содержащий культуру свободноживущего азотофиксатора под названием азотобактерин (Azoto-bacter chroococcum).

Позднее начали применять препарат фосфоробактерин, содержащий культуру Bacillus mega therium, препарат «силикатных» бактерий
В.Г. Александрова, содержащий культуру Bacillus muci-laginosus. Фосфоробактерин был рекомендован для улучшения фосфорного питания растений, а препарат «силикатных» бактерий В.Г. Александрова – для улучшения калийного питания растений. Однако в производственных условиях эти препараты не дали существенного эффекта.

Препарат АМБ (сокр. от автохтонная микрофлора группы Б), предложенный Н.М. Лазаревым в 30-40 гг. (нынешний его аналог – бактогумин), отличается тем, что в его состав входит большой комплекс микроорганизмов – аммонифицирующие, целлюлозоразрушающие, автохтонные микроорганизмы и др.

В последнее десятилетие разнообразие микробных землеудобрительных препаратов резко возросло как в мире, так и в России. С расширением наших знаний по биологии и систематике микроорганизмов, в частности, составляющих активное начало этих препаратов, дается более полное объяснение механизму их положительного действия.

В 80-х годах XX столетия японский исследователь профессор Теруо


Хига
предложил концепцию эффективных микроорганизмов (ЭМ) и создал сложный по количественному и качественному составу микроорганизмов ЭМ-препарат. Этот препарат составляет основу ЭМ-технологии, которая находит широкое признание в мире. В частности, применение этого препарата в земледелии улучшает качество почв и, как следствие этого, увеличиваются урожаи возделываемых на них сельскохозяйственных культур (Булгадаева и др., электронный ресурс).

При выращивании озимой пшеницы подтверждена возможность использования штаммов гриба р. Trichoderma и препарата экстрасол 55, активным биоагентом которого являются ризосферные азотофиксирующие бактерии и их метаболиты, для увеличения урожайности. Причём эффективность биопрепаратов зависит от степени удобренности почвы (Застежко и др., 2005).

В плане выяснения роли отдельных микроорганизмов на растения интересна работа Пиголевой С.В. с соавт. (2008). Она была посвящена влиянию колонизации сахарной свеклы штаммами бактерий Pseudomonas aureofaciens и Methylovorus mays на рост, корнеобразование, фотосинтез и устойчивость растений к фитопатогенам Erwinia carotovora и Sclerotinia sclerotiorum. При колонизации метилотрофными бактериями сахарной свеклы наблюдали более интенсивный рост этих растений, яркую окраску и более быстрое корнеобразование. Содержание клеток Methylovorus mays на листовой поверхности составляло от 1 до 3 тыс./см2. При колонизации растений штаммом Pseudomonas aureofaciens стимуляция роста не была отмечена. Локализация бактерий псевдомонад наблюдалась преимущественно в корневой зоне (Пиголева и др., 2008).

Стимуляция роста и развития растений метилотрофом Methylovorus mays, возможно, объясняется стимуляцией цитокининами, синтезируемыми этими бактериями, фотосинтетического аппарата растений (Муромцев и др., 1987).

Защита от фитопатогенов особенно эффективно проявлялась у растений, колонизированных штаммом Pseudomonas aureofaciens, который является к тому же деструктором ксенобиотиков (Пиголева и др., 2008).

В 1998 г. российский ученый, доктор медицинских наук Шаблин Петр Аюшевич на основе анабиотических микроорганизмов байкальской экосистемы создал отечественный ЭМ-препарат – «Байкал ЭМ1», который по некоторым показателям даже превзошел японский аналог.

«Байкал ЭМ-1» – концентрат в виде жидкости, в котором выращено более 80 штаммов лидирующих анабиотических (полезных) микроорганизмов, в реальности обитающих в почве. Препарат не содержит генетически измененных микроорганизмов. Особенностью ЭМ-препарата является то, что он включает устойчивую ассоциацию как аэробных, так и анаэробных микроорганизмов. Все они, несмотря на различие условий жизнедеятельности, сосуществуют в одной среде в режиме активного взаимообмена источниками питания, когда продукты жизнедеятельности одной группы служат питанием для другой и при этом происходит аккумуляция позитивных свойств объединенных микроорганизмов (ЭМ-технология…, 2006).

Эффективность препарата показана во множестве исследований, как на овощных (Гладышева, 2008; Донмез, Аллахвердиев, 2007; Юрина и др., 2005), так и на полевых культурах (Агапкин, 2005; Зыбалов, 2006; Блинов, 2008; Крымова, 2010). Есть работы, посвящённые влиянию на микробное сообщество почвы (Безлер, Крафт, 2004; Зыбалов, 2006). Работ по влиянию эффективных микроорганизмов на солеустойчивость сельскохозяйственных культур мало. Было исследовано действие препарата «Байкал ЭМ1» на ростовые процессы яровой пшеницы и фасоли при 0,4%-ом хлоридном засолении почвы и обнаружен его стимулирующий эффект, который проявился в более высокой всхожести и энергии прорастания семян, а также в прибавке урожая (Аллахвердиев и др., 2011). Так же выявлена стабилизирующая роль удобрения в определённой концентрации в условиях засоления среды на фотосистему II и фотосинтетические пигменты саженцев древесных растений (Allahverdiev, Atik, 2011).



Обоснование выбора темы.

В настоящее время изготовляются многочисленные «бактериальные удобрения». Многие препараты обладают комплексным действием. В ряде опытов достоверно установлено, что такие препараты оказывают большой положительный эффект на рост растений и их продуктивность. Однако во многих случаях при проведении полевых исследований препараты оказываются малоэффективными, т. к. микробы погибают уже в самом препарате или не размножаются в ризосфере и ризоплане (Звягинцев и др., 2005).

Поскольку препарат предполагается использовать в условиях солевого стресса, то необходимо провести всестороннее изучение его влияния на выращиваемую культуру и выявить его оптимальную концентрацию.

В ходе индивидуального развития высшие растения наиболее уязвимы на этапе прорастания семян, когда у них наблюдается минимальная устойчивость к неблагоприятным факторам и, соответственно, максимальная чувствительность к различного рода воздействиям. В связи с этим, растения в этой фазе развития представляют собой наиболее привлекательный объект тестирования, и различные параметры прорастания используются в качестве показателей общей токсичности среды обитания (Титова и др., 1999).



Объект и предмет исследования.

Объектом исследования является система озимая пшеница – засоленная почва – препарат «Байкал ЭМ1».

1. При проведении исследований используется мягкая озимая пшеница (Triticum aestivum L.) сорта «Московская 39». Авторы: Б.И. Сандухадзе, Е.Т. Вареница, Г.В. Кочетыгов.

2. Почва дерново-подзолистая, суглинистая. Содержание гумуса 2,1-2,5%, pH солевой вытяжки в слое почвы 0-20 см – 5,4, гидролитическая кислотность – 2,51 мг-экв на 100 г почвы. Содержание подвижных P2O – 237 мг, К2О – 134 мг на 1 кг почвы.

3. Микробиологическое удобрение «Байкал ЭМ1» представляет собой водный раствор, содержащий комплекс микроорганизмов, обитающих в природе (в байкальской экосистеме), и продуктов их жизнедеятельности. В этот комплекс входят Lactobacillus casei 21; Streptococcus lactis 47;
Phodopseudomonas palistris 108; Caccaromyces cerevisiae 76. Плотность препарата, относительная и кинематическая вязкость, показатель преломления не отличаются от показателей воды. pH препарата составляет 3,38±0,13, при первом разбавлении – 4,90±0,25 (Р<0,001), при втором – 6,53±0,13 (Р<0,001) (Блинов, 2008).

Цель и задачи исследования.

Цель работы заключается в установлении действия препарата «Байкал ЭМ1» на параметры роста и развития озимой пшеницы на ранних этапах развития в условиях засоления субстрата.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

1. Для выявления концентрации соли, создающей видимый, угнетающий эффект определить энергию прорастания и всхожесть семян пшеницы при следующих концентрациях NaCl (в %): 0; 0,3; 0,6; 0,9; 1,2; 1,5; 1,8; 2,1; 2,4.

2. Выявив 3 концентрации соли с явным угнетающим действием, определить энергию прорастания и всхожесть семян при замачивании их в растворах с соответствующими концентрациями NaCl, c добавлением препарата «Байкал ЭМ1» в разведениях 1:1000, 1:500, 1:100.

3. Определить параметры роста проростков пшеницы в условиях засоления (0,9% NaCl) с добавлением биопрепарата «Байкал ЭМ1» в разведениях 1:1000, 1:500, 1:100 на 30 день, при проведении проращивания в коробочках, на бумажных салфетках.

Здесь же определить длину 30-дневных проростков и массу их корней (в сыром и сухом виде).

4. Определить параметры роста проростков пшеницы в условиях засоления (0,9% NaCl) с добавлением биопрепарата «Байкал ЭМ1» в концентрациях 1:1000, 1:500, 1:100 на 30 день, при проведении проращивания в стаканчиках с землёй.

Здесь же определить длину 30-дневных проростков, массу корней и массу проростков (в сыром и сухом виде).

Методы исследования.

Энергия прорастания и всхожесть семян определялись в соответствии с ГОСТ 12038-84, но с внесением некоторых изменений: вместо чашек Петри применялись более высокие пластиковые коробочки, поскольку необходимо замерять длину проростков и вместо фильтровальной бумаги – бумажные полотенца. Влажность подстилки поддерживалась постоянной в течение всего периода проведения опытов, температура воздуха – 23-24°С. Энергия прорастания определялась на третьи, всхожесть – на седьмые сутки.

Взвешивание проводилось на аналитических весах, измерение длины – обычной линейкой.

Статистистическая обработка данных осуществлялась с помощью программы Microsoft Office Excel 2003.



Теоретическая и практическая значимость работы.

Полученные результаты могут быть применены при решении проблем повышения солеустойчивости растений и повышения качества засоленной почвы. Технология эффективных микроорганизмов станет альтернативой химических средств воздействия в сельском и лесном хозяйствах. Результаты исследований дадут толчок в разработке новых технологических решений для выращивания растений в условиях засоления.



Глава 1. ЭМ-технология как способ преодоления солевого стресса у растений, в частности, озимой пшеницы

1.1. Происхождение засоленных почв

Ежегодно по причине заболачивания и засоления выпадает из землепользования около 500 – 600 тыс. га сельскохозяйственных угодий. Подвержены засолению около 50% всех орошаемых земель земного шара


(Шуравилин, Кибека, 2006).

В засоленных почвах из катионов преобладает по массе, как правило, Na+, однако встречаются почвы с высоким содержанием Mg2+ и Ca2+. Из анионов наибольший вклад в почвенное засоление чаще всего вносят Cl- и SO42-, но встречается также засоление карбонатного типа (Физиология растений..., 2005).

В зависимости от происхождения различают следующие типы засоления: прибрежное, поверхностное, вызванное грунтовыми водами (артезианское) и вторичное. Процессы соленакопления и появления засоленных почв обусловлены рядом исторически сложившихся природно-климатических, историко-социальных, ирригационно-хозяйственных и технических причин. Одной из причин засоления почв является аридность климата. В условиях сухого и жаркого климата, когда годовая величина испарения во много раз превышает количество выпадающих осадков, поступление солей происходит из глубоких слоёв к поверхности земли. При этом вода испаряется, а соли, постепенно накапливаясь, засоляют почву.

Нередко засоление почв происходит в процессе миграции солей из соленосных осадочных пород, являющихся древними морскими отложениями.

Широкое распространение засоление получило в орошаемых районах, это так называемое вторичное засоление, когда сам человек ускорил процесс засоления ранее незасоленных плодородных почв. Его основной причиной является близкое залегание минерализованных грунтовых вод. Их подъём может быть вызван фильтрацией воды из каналов (Шуравилин, Кибека, 2006).

1.2. Солевой стресс у растений

Растения, эволюционно сформировавшиеся на засоленных почвах и адаптированные к высоким концентрациям солей в почвенном растворе, называют галофитами, а сформировавшиеся на незасоленных почвах – гликофитами. Последние выдерживают лишь слабое засоление и только некоторые из них, такие как хлопчатник, овёс, рожь и пшеница, – среднее (Физиология растений…, 2005).

Неблагоприятное влияние засоления субстрата начинается с момента прорастания семян, что выражается в снижении энергии их прорастания и всхожести, причём на первый показатель ингибирующее воздействие засоления проявляется в большей степени. Уменьшается количество боковых корешков, что, естественно, приводит к снижению водопоглощения и истощению растений. Засоление уже в малых концентрациях тормозит начало митотической деятельности меристемы корешков проростков (Медведев, 2004).

Растения, выращиваемые на засоленных почвах, как правило, относительно невелики. На листьях наблюдаются такие признаки, как побурение верхушек и краёв или внутренних участков листьев, пятнистость, курчавость и начинающийся хлороз (пожелтение). Могут происходить и внутренние анатомические изменения. Например, у томатов уменьшается доля сосудистых или проводящих тканей, а толщина клеточных оболочек проводящих тканей увеличивается. Нередко увеличивается и толщина листьев (Блэк, 1973).



1.2.1. Повреждающее действие солей

У гликофитов при повышенном содержании солей в почве нарушается водный и ионный гомеостаз, как на клеточном уровне, так и на уровне целого растения.



1.2.1.1. Эффекты, проявляющиеся на клеточном уровне

В настоящее время осмотическое и токсическое действия солей признаны главными повреждающими факторами на клеточном уровне.

При почвенном засолении вода не поглощается корневой системой из-за высокого осмотического давления (низкого водного потенциала) почвенного раствора (Физиология растений…, 2005). Повреждения, вызываемые засолением, сходны с теми, что наблюдаются при засухе (Медведев, 2004).

Снижение содержания воды в клетках и сопутствующее обезвоживанию увеличение концентрации ионов в цитоплазме вызывают различного рода нарушения в структуре и функциях биополимеров, в частности, происходит денатурация белков и подавляется их ферментативная активность, изменяется структура липидного бислоя мембран и нарушается их целостность. Деструктивные изменения в мембранах, в свою очередь, приводят к нарушению внутриклеточной компартментации веществ и подавлению электрогенеза. На клеточном уровне это выражается в потере тургора (Физиология растений…, 2005).

Природа токсического действия ионов, особенно первичных молекулярных повреждений, изучена мало. NaCl в концентрациях выше 0,4 М ингибирует многие ферменты вследствие нарушения гидрофобно-электростатического баланса сил, поддерживающих структуру белковых молекул. Однако, токсические эффекты проявляются уже при гораздо более низких концентрациях соли (меньше 0,1 М), указывая на специфические мишени действия ионов. Практически ничего не известно о мишенях токсического действия ионов хлора. Cl- может конкурировать с РНК и анионными метаболитами, такими, как бикарбонат, карбоксилаты и фосфаты сахаров, за анионные сайты связывания. Ион Na+ может взаимодействовать с катионными сайтами, вовлечёнными в связывание K+, Са2+ и Mg2+ (Физиология растений…, 2005).

Факторами, повреждающими макромолекулы, являются активные формы кислорода (АФК) – синглетный кислород, супероксидный радикал, гидроксил-радикал, пероксид водорода и ряд других форм. Их концентрации в клетках растений при почвенном засолении и засухе возрастают. Наблюдающиеся в этом случае токсические эффекты не связаны с непосредственным действием ионов на молекулярные мишени. Они возникают в результате вторичных процессов – взаимодействий биополимеров с накапливающимися при стрессе АФК (Физиология растений…, 2005).

В ответ на появление АФК возрастает активность антиоксидантных систем: повышается содержание аскорбата, супероксиддисмутазы, каталазы, пероксидазы и глутатионредуктазы (Медведев, 2004).

Известно, что дегидрогеназы и пероксидаза необходимы для сохранения жизнеспособности семян, и при запуске процессов, связанных с прорастанием, происходит интенсификация аэробных биоэнергетических процессов, активизация оксидаз, включая пероксидазу. Результаты наблюдений проростков при засолении показали значительное повышение у них активности пероксидазы в корнях, по сравнению с побегам и снижение активности каталазы в корнях (Луценко, 2010).

В условиях засоления NaCl интенсивность дыхания пшеницы возрастает, особенно резко у проростков и в фазу 3-х листьев. По мере развития растений этот показатель снижается (Кузнецова, 2006), что может быть связано, согласно литературным источникам, с токсическим действием NaCl на дыхательную активность митохондрий (Кун и др., 2001).

Исследования показали, что в условиях хлоридного засоления субстрата на различных культурах (кукуруза, хлопчатник и высшее водное растение) отмечено снижение функциональной активности хлоропластов и их хлорофилльной флуоресценции, а также повреждение фотосистемы II (Ganieva et. al., 1997; Ganieva et. al., 1998; Allahverdiev et. al.,1998). Результаты аналогичного характера были получены ранее на других культурах (Smillie et. al., 1982; Krishnaraj et. al., 1993). Однако внесение малых количеств NaCl приводит к увеличению термостабильности фотосинтетического аппарата


(Belkhodja at. al., 1994). Возможно, NaCl инициирует образование веществ, повышающих стабильность мембран тилакоидов (Иванов, 2010).
  1   2   3   4


База данных защищена авторским правом ©uverenniy.ru 2016
обратиться к администрации

    Главная страница