Хранить при температуре 2-8°С




Скачать 59.26 Kb.
Дата14.07.2016
Размер59.26 Kb.
ТЕСТОСТЕРОН

НАБОР ДЛЯ ЭНЗИМСВЯЗАННОГО ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА

Кат №: ТЕ080S

ХРАНИТЬ ПРИ ТЕМПЕРАТУРЕ 2-8°С

НАЗНАЧЕНИЕ

Для количественного определения концентрации тестостерона в человеческой сыворотке.
ВВЕДЕНИЕ

Тестостерон это С19 стероид с ненасыщенной связью между С-4 и С-5, кетоновой группой в С-3 и гидроксильной группой в β позиции С-17. Это стероидный гормон с молекулярной массой 288,4.

Тестостерон это наиболее важный андроген, секретируемый в кровь. У мужчин тестостерон секретируется, преимущественно, Лейдинговыми клетками яичек. У женщин около 50% циркулирующего тестостерона в периферической крови превращается из андростендиона, около 25% секретируется в яичниках и около 25% в надпочечниках.

Тестостерон отвечает за развитие вторичных половых признаков, а его определение помогает при распознавании гипогонадизма.

У женщин высокий уровень тестостерона обычно наблюдается при гирсутизме и вирилизации, поликистозе яичников, опухолях яичников, надпочечников и при гиперплазии надпочечников.

У мужчин высокие уровни тестостерона наблюдаются при патологии гипоталамо-гипофизарной системы, опухолях яичек, врожденной гиперплазии надпочечников и при раке простаты.

Низкие уровни тестостерона могут свидетельствовать о следующих заболеваниях: гипопитуитризм, синдром Клинефельтера, тестикулярной феминизации, орхидектоме, крипторхизме, ферментативной патологии и некоторых аутоиммунных заболеваниях.

ИФА набор тестостерона предназначен для измерения общего тестостерона в человеческой сыворотке.


ПРИНЦИП ИССЛЕДОВАНИЯ

Определение тестостерона методом ИФА основано на принципе конкурентного связывания тестостерона исследуемой сыворотки и конъюгата тестостерона-ПХ с постоянным количеством кроличьего анти-тестостерона. Микроячейки, покрытые козьими антикроличьими IgG инкубируют с 10 мкл. тестостероновых стандартов, контролей, сыворотки больных, со 100 мкл конъюгата тестостерона-ПХ и 50 мкл кроличьего антитестостеронового реагента при температуре 37˚С 90 минут. Во время инкубации известное количество меченного ПХ тестостерона конъкурирует с эндогенным тестостероном в стандарте, пробе или контрольной сыворотке за определенное число мест связывания на специфических антителах к тестостерону. При этом количество связанного меченного пероксидазой тестостерона обратно пропорционально содержанию эндогенного тестостерона в исследуемой сыворотке.



Несвязанный конъюгат меченого тестостерона отмывают из ячеек. После чего в ячейки добавляют ТМБ реагент в результате чего в них развивается голубая окраска. Развитие окраски прекращают путем добавления в ячейки стоп-раствора (соляной кислоты) и измеряют абсорбцию на ИФА ридере на длине волны 450 нм. Интенсивность развившейся окраски обратно пропорциональна содержанию тестостерона в исследуемой пробе. Стандартная кривая строится исходя из концентраций и абсорбции стандартов. Концентрации тестостерона контролей и исследуемого находят по стандартной кривой.
РЕАГЕНТЫ

Реагенты, имеющиеся в наборе:

  • Микротитрационные ячейки, покрытые козьими антикроличьими IgG, 96 ячеек.

  • Стандарты тестостерона: 6 флаконов (0,5мл). Готовы к использованию.

  • Кроличий антитестостероновый реагент (7 мл) Готов к использованию.

  • Энзимный Конъюгат тестостерона, 1 флакон (12мл). Готов к использованию.

  • Контрольный материал: 1 и 2, жидкий, 0,5 мл. Готов к использованию.

  • ТМБ реагент (один флакон). 11 мл Готов к использованию.

  • Стоп – раствор (один флакон) 11 мл.

Материалы необходимые для исследований, непоставляются в составе наборе:

  • Точные дозаторы: 10 мкл., 50 мкл., 100 мкл., 1,0 мл.

  • Наконечники для пипеток

  • Деионизированная вода

  • Шейкер.

  • Абсорбирующая бумага.

  • Миллиметровая бумага.

  • ИФА ридер.



ПРЕДОСТЕРЕЖЕНИЯ ПОЛЬЗОВАТЕЛЮ


Поскольку в настоящее время не существует методов, способных дать полную гарантию отсутствия в материале вирусов гепатита В, ВИЧ либо других инфекционных агентов, следует помнить, что реагенты этого набора изготовлены и человеческой крови, и с ними следует обращаться, как с потенциально инфицированными. Обращаться с ними следует по 2 Уровню Биозащиты, как рекомендуется для каких либо потенциально инфицированных человеческих сывороток и проб крови Центром Контроля Болезней /Национального института здоровья “Биозащита в микробиологических и биомедицинских лабораториях”, 1984г.

ОТБОР И ПОДГОТОВКА ПРОБ


  1. Отберите образцы крови и немедленно отсепарируйте сыворотку.

  2. Сывороточные образцы могут храниться при температуре 2-8˚С до 5 дней, либо при температуре -20˚С или ниже более длительное время (до 1 месяца). Не следует использовать образцы с выраженным гемолизом и липемией.

  3. Избегайте повторного замораживания образцов.

  4. Перед исследованием образцы следует полностью разморозить и тщательно перемешать.

  5. Внимание: в этом исследовании не следует использовать образцы, содержащие азид натрия.



ХРАНЕНИЕ НАБОРА


До вскрытия тестовый набор следует хранить при температуре 2-8˚С, плашку следует хранить во влагонепроницаемом пакете с дессикантом, для уменьшения влияния атмосферной влаги. После вскрытия набор сохраняет стабильность до истечения срока реализации, указанного на нем, при соблюдении условий хранения, описанных выше. ИФА ридер с шириной полосы до 10 нм и диапазоном оптической плотности 0-3 на длине волны 450 нм пригоден для измерения показаний этого набора.
ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ

  1. Перед использованием все реагенты следует привести к комнатной температуре (18-26˚).

  2. Сыворотки, в которых ожидается концентрация тестостерона свыше 18 нг/мл, следует предварительно развести разбавителем сыворотки.



ПРОЦЕДУРА ИССЛЕДОВАНИЯ


  1. Закрепите в штативе необходимое количество ячеек.

  2. Внесите по 10 мкл. стандартов, проб и контролей в соответствующие ячейки.

  3. Весите 100 мкл. конъюгата тестостерона – ПХ в каждую ячейку.

  4. Внесите 50 мкл. кроличьего анти-тестостеронового реагента в каждую ячейку. Тщательно перемешайте в течение 30 секунд. Тщательное перемешивание исключительно важно.

  5. Инкубируйте 90 минут при 37˚С.

  6. Удалите инкубационную смесь в контейнер для отходов, промойте ячейки 5 раза по 300 мл деионизованой водой, тщательно удалите остатки жидкости из ячеек, стряхнув их на абсорбирующую бумагу. (Не используйте для промывания водопроводную воду).

  7. Внесите в каждую ячейку по 100 мкл. ТМБ реагента. Осторожно перемешайте в течение 5 секунд.

  8. Инкубируйте при комнатной температуре (18-26˚С) 20 минут.

  9. Остановите реакцию добавлением в каждую ячейку 100 мкл стоп-раствора.

  10. Осторожно перемешивайте 30 секунд. Очень важно убедиться, что голубая окраска полностью перешла в желтую.

  11. Учтите абсорбцию на ИФА ридере на длине волны 450 нм в течение 15 минут.

ПОДСЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ



  1. Учтите значение абсорбции для каждого референс стандарта, контролей и проб.

  2. Постройте стандартную кривую на миллиметровой, отмечая точки по абсорбции соответствующего стандарта: концентрацию тестостерона (нг/мл) по оси Х, значения абсорбции по оси У.

  3. Исходя из значения абсорбции исследуемых проб, по стандартной кривой определите концентрацию в них тестостерона.

  4. При подсчете результатов предварительно разведенных образцов, умножьте их значения на фактор разведения.

ПРИМЕР СТАНДАРТНОЙ КРИВОЙ

См. оригинальную инструкцию.

Внимание: приведенная кривая является примером и не может быть использована для анализа.


ОЖИДАЕМЫЕ НОРМАЛЬНЫЕ ПОКАЗАТЕЛИ
Каждой лаборатории следует установить собственный диапазон нормы исходя из особенностей конкретной популяции. ИФА тестотерона был проведен в случайно отобранных образцах. Результаты исследования были следующими:



Тестостерон нг/мл

Абсорбция (450нм)

0

3,096

0,1

2,700

0,5

2,185

2,0

1,709

6,0

1,105

18,0

0,516



Мужчины: поздний препубертат 0,1-0,2 нг/мл

Взрослые 3,0-10,0 нг/мл


Женщины: поздний препубертат 0,1-0,2 нг/мл

Фолликулиновая фаза 0,2-0,8 нг/мл

Лютеиновая фаза 0,2-0,8 нг/мл

Постменопауза 0,08-0,35 нг/мл


ЛИТЕРАТУРА

См. оригинальную инструкцию.


База данных защищена авторским правом ©uverenniy.ru 2016
обратиться к администрации

    Главная страница