Антиоксиданты



Скачать 466.25 Kb.
страница1/3
Дата05.08.2016
Размер466.25 Kb.
  1   2   3
АНТИОКСИДАНТЫ
ВВЕДЕНИЕ
Широкий выбор питательных веществ, использующихся отдельно, или как ингредиенты, в кормлении быстро подвергаются окислению при воздействии воздуха. Реакция окисления необратима и следствие химических изменений, приводящих к потере, которая может быть, в экстремальных ситуациях, полной. Последствие таких изменений приводит к уменьшению срока хранения сырья и готовых кормов, если только не предпринять попытку предотвращения окисления, которое происходит без видимых причин. Реакцию окисления часто называют «автоокислением» или просто «прогорклостью».
Автоокисление – это понятие, описывающее цепочку разрушительных процессов, которые происходят при наличии кислорода во всех органических веществах. Антиоксиданты – это вещества, которые препятствуют или предотвращают от происшествия этих процессов. Как правило, молекулы, которые содержат атомы, ненасыщенные углеродом (рис. 1), чувствительны к автоокислению. Компоненты кормов для животных, подвергающиеся автоокислению, включают в себя жиры, масла, витамины и пигменты.

Рис. 1

Олеиновая кислота – ненасыщенная жирная кислота

СН3 (СН2)7 СН = СН (СН2)7 СООН

Автоокисление видоизменяет ингредиенты корма разными способами. Витамины теряют свою активность, пигменты – свой цвет, у жиров и масел, как правило, появляется нежелательный вкус и запах, процесс известный как прогорклость, которая может привести к проблемам вкусовой привлекательности.
АВТООКИСЛЕНИЕ
Химические изменения, сопровождающие автоокисление являются комплексными. Тем не менее, основные этапы общие для всех реакций: стимулирование, распространение и заключительный этап.
Этап стимулирования включает формирование свободных радикалов и это катализируется наличием металлических ионов, в частности, железа и меди (рис. 2). Эти свободные радикалы существуют только долю секунды перед воздействием с чувствительными молекулами или перед нейтрализацией с помощью антиоксиданта.
Рис. 2

Потом свободные радикалы (R-) взаимодействуют с кислородом в воздухе и атомами ненасыщенных углеродов для формирования пероксида. (Рис. 3). Реакция дальнейшего окисления молекул приводит к гидропероксиду и другим сводным радикалам. Этот процесс относится к этапу распространения.


Рис. 3

Во время окисления происходит изомеризация конфигурации cis в trans, и развивается соединенная система. Потом молекулярный кислород поражает структуру до пероксидов и гидропероксидов.


И пероксиды и гидропероксиды дополнительно окислены до неизменяемых результатов на заключительном этапе автоокисления. Продукты заключительного этапа – кислоты, альдегиды, эпоксиды, гликоли и кетоны в результате приводят к устойчивому неприятному запаху в корме, который сильно ограничивает потребление.


эпоксиды и гликоли

Постоянно существует соотношение между содержанием пероксида в жирах или маслах корма и уровень прогоркания, определенный органолептическим анализом. Накопление пероксида на начальном этапе медленное, и поэтому закономерное изменение цвета и запаха также происходит медленно (рис. 4). Но все же, когда содержание пероксида достигает критического значения, экспоненциальный рост в пероксиде и сырье становится прогорклым.
Рис. 4

Развитие окисления в корме





АНТИОКСИДАНТЫ
Меры, предпринимаемые ранее для предотвращения автоокисления, состояли из использования антиоксидантов. Концепция использования таких препаратов заключается в том, что на основании подвижного атома водорода, препарат вступает в реакцию со свободными радикалами таким образом, что в дальнейшем не происходит размножение свободных радикалов (рис. 5).
Рис. 5

Этоксиквин



Свободный радикал, образованный с помощью антиоксиданта (AFR) менее химически активен, чем основной радикал, и не вступает в реакцию для образования следующих радикалов. антиоксиданты, показанные на графике – бутилгидроксианизол (ВНА) и этоксиквин. Другой антиоксидант, который используется в животном корме – бутилгидрокситолуол (ВНТ). Существуют и другие антиокидантные вещества, но только немногие удовлетворяют строгим критериям по вопросу нетоксичности, специфике реакции и эффективности слабой крепости.


Есть возможность использование предупреждающих антиоксидантов, которые понижают процент возникновения цепей. Эти предупреждающие антиоксиданты являются металлическими инактиваторами, которые хелатируются с металлическими ионами, допускающими катализацию цепной реакции. Хелатообразующее вещество также необходимо в любом антиоксиданте для предотвращения начального этапа автоокисления.
Антиоксиданты используются для контроля этапа распространения, если и когда он возникает. Не всегда одна комбинация антиокисидантов подходит к каждому применению, особенно когда используется множество видов компонентов. Но все же использование комбинации антиокидантов с металлическими инактиваторами, разрушающих цепочки, мы можем вмешаться и в начальный этап и этап распространения окисления.
С полным антиокидантом заключительный этап окисления, прогорклость и потеря витаминов не должны начаться.

АКТИВНЫЕ ИНГРИДИЕНТЫ В ОКСИСТАТЕ
Все активные ингредиенты, используемые в продукте ОКСИСТАТ, общеприняты в кормах для животных и одобрены Европейскими властями.

Лимонная кислота или ее соли, дигидрат цитрата натрия – самые эффективные хелатообразующие вещества, естественно найденные в биологических организмах для связи металлических ионов. Хелатообразование металлических ионов сводит к минимуму образование свободных радикалов (начальный этап автоокисления), добавление дигидрата цитрата натрия в ОКСИСТАТ делает этот продукт уникальным. Главное преимущество использования цитратного хелатообразующего вещества в том, что он не будет передавать бесполезных минералов животному в отличие от некоторых небиологических хелатообразующих веществ таких как кислота этилендиаминтетраацетата (ЕДТА) или фосфорная кислота.


Лимонная кислота Е330 является самой эффективным, природным хелатообразующим веществом, найденной в биологических организмах. Добавление лимонной кислоты в ОКСИСТАТ делает продукт идеальным для пищевой индустрии.
Бутилгидроксианизол (ВНА) Е320 очень эффективный в стабилизации гидрогенизированных растительных масел, рыбных и печеночных масел, витаминов, ароматов и экстрактов. ВНА хорошо растворим в жирах и маслах, и имеет свойство хорошей «проводимости» в гранулированных и экструдированных кормах даже при температурах выше 1800С. Следовательно, ВНА гарантирует, что любой продукт тепловой обработки имеет полный срок хранения.
Бутилгидрокситолуол (ВНТ) Е321 чуть менее растворим, чем ВНА, но особенно эффективен в животных жирах, хотя менее эффективен чем ВНА в растительных маслах. ВНТ, в сочетании с ВНА, особенно эффективен в замедлении автоокисления ароматизированных липидов, которые так важны во всех кормах (Рис. 6). ВНТ – пространственно блокированный фенол, который может порождать окисление, и продукт димеризации, известный как хинон стильбена, который имеет стойкий желтый цвет. Продукт окисления может образовываться в очень малом количестве таком малом как 0,00001% и может окрасить ОКСИСТАТ в желтый цвет. Продукт не вреден и не понижает эффективности продукта.

Рис. 6


1. 0,015% ВНА

2. 0,015% ВНТ

3. 0,01% ВНА+ВНТ

4. 0,01% ВНА+EQ

5. 0.006% BHA+BHT+EQ+ дигидрат цитрата натрия

Полностью смешанные антиоксиданты будут подавлять автоокисление и замедлять начало прогорклости и других вредных изменений. Но все же состав должен быть правильно совмещен, ингредиенты должны применяться ранее в корме или сырье, затягивать начало окисления и иметь хорошую защиту против автоокисления, что должно быть очевидным. Добавление в сырье, которое уже подверглось автоокислению будет иметь мизерную или вообще никакой эффективности в препятствии симптомов проблемы. Так же, антиоксидант постепенно инактивируется во время препятствия автоокислению, и поэтому когда все задействованное инактивировано или израсходовано, окислительные изменения будут происходить беспрепятственно. Логически можно предположить что, чем большее количество антиоксиданта будет задействовано, тем более продолжительной будет защита от автоокисления. Это относится к антиоксидантам с относительно низкой концентрацией и на практике это оптимальная концентрация. Этот уровень для большинства смешанных антиоксидантов – 0,1-0,2 г/кг веса, а этот уровень концентрации в готовом корме соответствует максимальному уровню антиоксидантов, который разрешен во многих странах.

Экспериментальные исследования
Как можно увидеть на рис. 6, состав антиоксиданта, содержащий эффективные ингредиенты (ВНТ, ВНА, EQ) вместе с дигидратом цитрата натрия как хелатообразующий агент, превосходит состав, содержащий только два таких ингредиента. Это и является основой ОКСИСТАТА.
ОКСИСТАТ – это часть нового поколения антиоксидантов кормов для животных, был предметов двух независимых исследований, проводимых Food Analytical Services, Reading

(University of Reading) and Servaco nv, Бельгия. В первом исследовании ОКСИСТАТ сравнивали с конкурентным продуктом, а во втором с двумя отдельными компонентами ВНТ и этоксиквином. Применяемые методы признаны стандартными для определения антиоксидантов. Исследование коэффициента жирных кислот (стеариновая : линоленовая) показывает влияние окисления на ненасыщенные атомы углерода – вырабатывание менее вкусных, насыщенных кислот.




Копии отчетов о проведенных исследованиях компанией Food Analytical Services в Бельгии ОКСИСТАТА и независимой Венгерской лабораторией, где продукт также известен как AWOX AW-OP 101.

Независимое тестирование добавления витаминов было проведено Aspland and James, консультантами-аналитиками в Великобритании.
Сертификат анализа ВМ/gd 1514.3

Agil Agriculture

Fishponds Road

Wokingham

Berkshire RG 11.2.QL

Дата отчета: 29.06.87


Определение эффективности антиоксидантов на свиное сало.
Этот доклад описывает определение Этоксиквина, BHT и ОКСИСТАТА как антиоксидантов защиты свежего свиного сала.
1. МЕТОДИКА ПРОВЕРКИ

Ускоренные испытания стабильности образцов сала выполнялись при повышенной температуре (1000 С).

Окисление образцов в дальнейшем улучшилось, непрерывно помешивая горячих образцов, в магнитной мешалке, для обеспечения интенсивного контакта сала с воздухом.

Через равные промежутки времени, образцы вытаскивают для аналитического определения уровня окисления.


2. Тестируемые образцы

Тестировались четыре образца, описанные ниже.



  1. Сало с добавлением 200 мг/кг мела – контрольный образец.

  2. Сало с добавлением 200мг/кг Этоксиквина.

  3. Сало с добавлением 200мг/кг ВНТ.

  4. Сало с добавлением 200 мг/кг ОКСИСТАТА.

Во всех случаях сало бралось с одного и того же образца свежего свиного сала.
3. ПАРАМЕТРЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Все аналогичные образцы наблюдались двумя разными и независимыми способами.


А. величина перекиси

Этот титрометрический метод определения уровня окисления давно принят и общеизвестен.

Кроме того, он дает быстрое определение состояния образцов в процессе.
Б. профилирование жирной кислоты

Когда происходит окисление триглицеридов в ненасыщенных жирных кислотах, контролирование последних – очевидный способ следующих в окислительном процессе.

Так как насыщенные жирные кислоты менее чувствительные к окислению, они могут свободно быть использованы как внутренний стандарт.

Поэтому, отношение стеариновой кислоты (18.0) к линоленовой кислоте (18.3) прямо имеет отношение к уровню окисления образцов.




4. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ


А. величина перекиси

Время (часы)

Величины перекиси мэкв/кг










Контроль

Этоксиквин

ВНТ

ОКСИСТАТ

0,5

<10

<10

<10

<10

1

11

<10

<10

<10

2

35

<10

<10

<10

4

64

<10

<10

<10

6

148

<10

<10

<10

7




18

<10

<10

8




-




<10

9




59

15

<10

10




114

-

<10

11







55

<10

12







109

<10

14










13

16










22

18










27

22










83

23










118

Графическое изображение этих данных отображено на рисунке 1.


Рис. 1 Определение величин перекиси как функции времени для

  1. подконтрольный образец сала

  2. 200 мл/кг Этоксиквина

  3. 200 мл/кг ВНТ

  4. 200мл/кг ОКСИСТАТА




Б. профилирование жирной кислоты




Время (часы)

Отношение 18:0 (Стеариновая кислота) / 18:3 (Линоленовая кислота)




Контроль

Этоксиквин

ВНТ

ОКСИСТАТ

0,5

13,0

12,9

12,9

12,0

1

13,8










2

14,2










4

15,7










5

18,2

13,7

13,7




6

19,1

14,7







9




23,2

14,2




10




26,0




12,8

11







15,2




12







18,0




16










13,0

18










13,2

22










16,2

23










17,8

Графическое изображение этих данных отображено на рисунке 2.


Рис. 2 Определение отношение насыщенных/ ненасыщенных жирных кислот для:

  1. подконтрольный образец сала

  2. 200 мл/кг Этоксиквина

  3. 200 мл/кг ВНТ

  4. 200мл/кг ОКСИСТАТА





ВЫВОДЫ

Эффективность антиоксидантов под наблюдением можно легко сравнить, начертив график вводного периода индивидуальных образцов.







Часы

Контроль

2,6

Этоксиквин

7,8

ВНТ

10,4

ОКСИСТАТ

20,00

Рис. 3. Вводный период образцов с добавлением Этоксиквина, ВНТ, и ОКСИСТАТА.





Вводный период



Контроль



Этоксивин

ОКСИСТАТ


ЭФФЕКТ АНТИОКСИДАНТА – ИССЛЕДОВАНИЕ

По просьбе AWEX Hungary было проведено сравнительное исследование на разные уровни эффективности различных антиоксидантов. Во время сравнительного исследования Эндокс сухой, ВНТ и EMQ были включены в состав AWOX OP lol, изготовленный фирмой AWEX.


1). Начальная основа.

Жиры растительного и животного происхождения являются очень важными источниками энергии, практически обязательной частью кормов для животных.


Но применение растительных масел и животных жиров ограничено из-за их срока хранения. Разложение жиров обуславливается сложным процессом, в котором микробиологические и ферментные факторы (гидролиз) и, особенно, окислительное действие химического характера, играют большую роль.
Сейчас механизм окислительного процесса хорошо известен. Под воздействием различных первичных факторов (н-р световая или тепловая энергии, сильные проводники и т.д.) от молекул масел и жиров, содержащих ненасыщенные соединения, действуют свободные радикалы огромной энергии. Свободные радикалы с кислородом, через образование пероксидного радикала, разрушают новые двойные соединения, приводящие к составу подобного перекиси вместо двойного соединения и к более новому свободному радикалу.
Перекиси разлагаются на альдегиды, кетоны, спирт и свободные радикалы, которые приводят к ускорению окислительного процесса – подобно цепной реакции – с помощью разрушения более новых двойных соединений.
Антиоксиданты являются препаратами для предотвращения этого процесса. Механизм их действия во многом зависит от того, на какой стадии окислительного процесса они заблокируют исходную причину цепной реакции, например, задерживать микроэлементы, формирующие первоначальный результат, предотвратить реакцию кислорода с жирами или инактивировать свободные радикалы. В узком смысле, вещества этих описаний называются антиоксидантами.
Антиоксиданты как препараты, включающие в себя один или более компонентов, выполняют вышеупомянутый блокирующий механизм – с помощью одного или более элементов – действие, защищающее жиры. Их действие, а также их использование во многом зависит от разных факторов (например, токсичность, технологическая применимость, цена и т.д.), поэтому точное сравнение эффективности действия разных препаратов почти всегда требует выполнения нескольких процедур. Ниже приведены самые распространенные из этих процедур:


  • Исследования хранения – конечно же, одного образца обработанного антиоксидантом, и другого необработанного. Их помещают на склад, где они не защищены от воздуха на большой площади. Хранение может быть при комнатной температуре или выше (обычно до 60-65 С0)в освещенном или темном помещении и т.д. Эффективность антиоксиданта характеризуется периодом времени по сравнению с контрольным образцом, где процесс окисления еще не начался. Начало окислительного процесса может быть определено количеством перекисей, т.е. отслеживание повышения количества состава перекиси.




  • Метод активного кислорода (безотлагательное рассмотрение результата). Согласно этому методу, воздушный поток постоянно подается через жиры, обычно при высокой температуре. Начало окислительного процесса также определяется изменением соединения перекиси.




  • Метод с применением кислородного баллона. Жир помещается в закрытый кислородный баллон, и измеряется кислородное атмосферное давление. Окислительный процесс будут виден по уменьшению атмосферного давления кислорода в баллоне.




  • Исследование тиобарбитуровой кислотой, исследование анизидином и т.д. С помощью этих методов окислительный процесс можно отслеживать по появлению соединения, развивающегося в процессе окислительного процесса (например, manondialdehid).

Также, кроме наиболее часто используемых методов есть несколько новых методов, где летучие вещества, вызванные окислительным процессом, обнаруживаются с помощью разных практичных методов (метод определения жидкой фазы в газе, кондуктометрическое измерение и т.д.).


Наши исследования проведены согласно традиционного методу – исследование хранения. При выборе метода были решающими следующие факты:


  • В процессе изготовления комбикорма только в Венгрии используют антиоксидант как один из компонентов смеси гранулированных материалов. Поэтому эффективность антиоксиданта лучше охарактеризовать этим методом, так как, например, метод проверки эффекта антиоксиданта в жире относится к гомогенезу.




  • Смесь с антиоксидантом – согласно практическому опыту – имеет тот же эффект антиоксиданта даже при содержании значительно менее активного ингредиента, чем те же вещества в чистом виде. Вероятно, не только синергизм играет роль, но в результате ограничения мер грануляции, во многих случаях чистое вещество не всегда может быть гомогенетически смешано с кормом, поэтому не всегда вырабатывает действующий эффект. (В последствии, на месте нельзя будет исключить прогорклые участки корма, следовательно, нельзя будет остановить реакцию даже более большим количеством ингредиентов). Исходя из этой точки зрения, более реальной картины можно достигнуть с помощью исследования хранения, используя разнородные обстоятельства.




  • При исследовании хранения используется число перекисей для прослеживания окислительного процесса. В Венгрии число перекисей – официально признанная мера, характеризующая начальную стадию прогорклого процесса, например, число р-анизидина является неофициальным для льняной промышленности. (Использование числа перекисей обуславливается значительным физиологическим эффектом состава перекиси в животных органах).


2). Выполнение исследования.
Для эксперимента мы использовали свежеэкструдированную сою, необработанную антиоксидантом. Мы посчитали, что именно экструдированная соя подойдет для исследования эффективности антиоксидантов, потому что:


  • Соя содержит приблизительно 16-22% растительных масел и соевое масло содержит жирные кислоты богатые двойными соединениями, что означает, что соя особенно чувствительна к окислению.

  • Экструдирование, сделанное при сравнительно высокой температуре и высоком давлении, может оказывать действие, инициирующее окислению в дополнение к структурному облучению вещества. На основе нашего опыта, экструдирование как действие, может иметь значительный инициирующий эффект на окислительный процесс также и других веществ.

  • Экструдированная соя широко используется в кормовой практике, поэтому исследование эффективности антиоксиданта имеет также и прямое практическое значение.

В 2 кг свежеэкструдированной сои мы добавляем ровно 120 мг/кг концентратов антиоксиданта разных видов. 120 мг/кг эквивалент концентрации смешанных антиоксидантов в отношении приготовления, т.е. мы не приняли во внимание их состав ингредиентов.


Мы смешали 2 кг ингредиентов с антиоксидантом гомогенетически и поместили в пластиковые мешки одинакового размера. Мешки находились открытыми в темном месте, в термостате лаборатории при 60 С0. Наружность открытых мешков, незащищенных от воздуха, была практически одинаковой во время хранения.
Соответствующие ингредиенты были подготовлены для хранения:
1) Контрольный образец без антиоксиданта (экструдированная соя)

2) 120 мг/кг этоксиквина, в составе экструдированной сои

3) 120 мг/кг ВНТ, в составе экструдированной сои

4) 120 мг/кг AWOX OP lol, в составе экструдированной сои

5) 120 мг/кг Эндокс сухой, в составе экструдированной сои
Не имея опыта в распознавании начала процесса прогорклости, мы сделали измерения смесей сразу после смешивания и каждый день после этого. Так как обнаружилось, что число перекисей в контрольном образце не изменяется уже много дней, мы продолжили измерения на каждый второй день.
Мы планировали продолжать измерения, пока число перекиси не начнет значительно увеличиваться и превысит число 25. (Согласно рекомендациям в Венгрии и так как мы изучили процесс прогорклости вещества, можно считать этот показатель как начало процесса).
Кроме измерения числа перекиси мы также измеряли числа кислоты так как появление свободных жирных кислот может быть предположением начала окислительного процесса.
Измерения чисел кислоты и чисел перекиси были проведены согласно MSZ 6830/11 «Определение чисел перекиси и чисел кислоты».
Графическое изображение результатов измерения содержится в Приложении №1, соответственно данные измерения в Приложении №2.
3). Определение результатов измерения.
Измеренные числа перекиси в контрольном образце, а также в образцах, обработанных антиоксидантами, показали, что в течении 10 дней окислительный процесс не начался. Несоответствие результатов измерения обуславливаются расхождением измерительного метода.
На 12й день увеличение числа перекиси в контрольном образце можно рассматривать предвзято, так как с этого времени увеличение числа перекиси заметно ускоряется.
В случае образцов, обработанных антиоксидантом, увеличение числа перекиси практически можно предвзято рассматривать с 16го дня, хотя оно не слишком велико, а с 18го дня в случае всех образцов значение превышало 25.

Измерения на 20й день явно подтвердили, что окислительный процесс начался.


Числа кислоты практически всегда оставалось на низком уровне во время всего периода хранения. Хотя теоретически во время развития окислительного процесса, также можно ожидать и увеличение числа кислоты, но согласно настоящим измерениям, образование кислотных соединений, возникающих из соединений перекиси, было до сих пор незначительным на 20й день. Возможно, увеличение числа кислоты может начаться в более поздний период.
На основании результатов измерения нет существенной разницы между антиоксидантами. Согласно видимой разницы чисел на 20й день невозможно определить, какой из антиоксидантов более эффективен. С этой точки зрения можно сделать только вывод, что число перекиси ниже или выше, если только после этого более низкое число не начнет увеличиваться. Хотя на данный момент фактическое увеличение числа перекиси практически происходило в каждом образце в один и тот же промежуток времени.
Других выводов вынести нельзя, даже если бы измерения сделали не толь на 18й и 16й, а и на 17й день тоже. В этом случае возможная разница в числах перекиси могла отличаться более значительно, но сравнивая период из шести дней, когда началось увеличение числа перекиси раньше в контрольном образце, нет практического значения в разнице времени в один день.
Тем не менее серия измерений подтвердила, что антиоксиданты, содержащие гораздо меньше ингредиентов (AWOX OP lol, Эндокс сухой), могли иметь ту же эффективность как и препараты, содержащие чистый ингредиент (EMQ, BHT).
Удивительно, как поздно начался окислительный процесс в экструдированной сое. Согласно нашим ранним исследованиям с экструдированной соей (необработанной антиоксидантом), окислительный процесс начался спонтанно и намного раньше при комнатной температуре, при обычных условиях хранения, хотя в остальных случаях образцы экструдированной сои могли храниться почти неограниченное время, и даже после 30-40 дней не началось прогорклости.
Может этот феномен может быть связан с видами сои, уровнем зрелости, возможным содержанием различных токоферолов, так как все это может повлиять на срок хранения.
Мы должны подчеркнуть, что все это только предположения, и не подтверждено измерениями.

Но тем не менее, это реальный случай, когда вещество в процессе исследования оставалось в первоначальном состоянии удивительно долгое время.


Дабас, 17 февраля, 1993 г.
Dr. György Koppány

Директор


Приложение № 2

ЭФФЕКТ АНТИОКСИДАНТА – ИССЛЕДОВАНИЕ



Название вещества

Контрольный образец

Обработка Этоксиквином

Обработка ВНТ

Обработка AWOX OP lol

Обработка Эндоксом сухим

Количество дней хранения

Число кислоты/ перекиси

Число кислоты/ перекиси

Число кислоты/ перекиси

Число кислоты/ перекиси

Число кислоты/ перекиси

0

1

6

1

7

1

6

1

6

1

6




2

8

2

11

2

10

2

12

2

9

2

2

7

2

7

2

6

2

9

2

8

3

2

7

2

9

2

8

2

8

2

8

4

2

8

2

7

2

6

3

8

2

6

6

2

6

2

6

2

6

2

6

2

6

8

2

9

3

8

2

8

2

8

3

9

10

4

11

2

6

3

9

5

14

3

9

12

2

15

2

10

2

9

2

11

2

10

14

3

25

2

10

2

11

3

12

2

14

16

3

31

2

14

3

11

3

14

2

11

18

3

60

2

30

3

24

3

25

2

27

20

3

66

2

42

3

34

3

26

3

35



Поделитесь с Вашими друзьями:
  1   2   3


База данных защищена авторским правом ©uverenniy.ru 2019
обратиться к администрации

    Главная страница